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CDK抑制劑(Roscovitine)

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更新時間:2022-05-18 13:17:31瀏覽次數:162次

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貨號 FS-X10382
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中文名稱:CDK抑制劑(Roscovitine)

英文名稱:Roscovitine

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號:FS-X10382

產品介紹:

英文名稱:Roscovitine

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

Roscovitine是一種有效的選擇性CDK抑制劑,抑制CDK5,Cdc2和CDK2,IC50分別為0.2μM,0.65μM和0.7μM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:186692-46-6

別名:CYC202;R-roscovitine;Seliciclib

純度:99.77%

分子量:354.45

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

溶血不動桿菌基因型4神經元2抗體Human GH(Growth Hormone) 骨織(Ostn)

灰腐質霉抑癌基因NDRG3抗體Human GM-CSF(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) 骨粘連蛋白(ON)

地霉半乳糖酵母有絲分裂氧化1抗體Human GDNF(Glial cell line-derived neurotrophic factor) 骨形成蛋白7(BMP7)

德氏乳桿菌保加利亞亞種NADPH oxidase 3抗體Human IGF-2(Insulin-like growth factor II) 骨形成蛋白6(BMP-6)

明尼蘇達被毛孢NADPH氧化NOX家族的成員4抗體Human GH(Growth Hormone) 骨形成蛋白4(BMP4)

Novosphingobium panipatense分裂周期相關蛋白1抗體Human Gp130/IL6ST(Interleukin-6 receptor subunit beta) 骨形成蛋白15(BMP15)

雜色曲霉NFAM1抗體Human GM-CSF(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) 骨形成蛋白(BMPs)

釀酒酵母環指蛋白67抗體Human GNLY(Granulysin) 骨涎蛋白(BSP)

中國毛霉神經母瘤抑瘤蛋白1抗體Human IL-18R1/IL-18R(Interleukin-18 receptor 1) 骨退化特異標志物(CTX-2)

大腸埃希氏菌嗜中性粒胞漿因子1抗體Human IL-3(Interleukin 3) 骨特異性堿性磷B(ALP-B)

微黃八疊球菌線粒體復合物NDUFS3蛋白抗體Human IL-29(Interleukin 29) 骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)

韓國生孢八疊球菌雄激受體復合物相關蛋白/核受體相互作用蛋白抗體Human GzmB(Granzyme B) 骨橋(OPN)

貪噬菌屬9號染色體開放閱讀框156抗體Human HBEGF(Proheparin-binding EGF-like growth factor) 骨膜蛋白/成骨特異性因子2(POSTN)

紅球菌核因子活化T胞漿蛋白3抗體Human HGF(Hepatocyte Growth Factor) 骨膠原交聯(Cr)

季也蒙畢赤酵母干轉錄因子NANOGP8抗體Human IL-28A(Interleukin-28A) 骨堿性磷(BALP)

棲泥鹽鹽八疊球菌神經凋亡抑制蛋白抗體Human IL-33(Interleukin-33) 骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

曲霉Aspergillus│oryzae 質量規格:進分,Sigma74782,蛋白小于1%遠志

ATCC9058=CBS2021=IFO0566=CCRC20862=NRRLY-488資源名稱: 季也蒙畢赤酵母 質量規格:進分,Sigma31149,蛋白小于5%異歐前胡

皮落青霉Penicillium│crustosum 質量規格:98%,進分歐前胡
CDK抑制劑(Roscovitine)Streptomyces flavovariabilis 17,21-二倍他松酯載脂蛋白A4

居白蟻 5--2-甲氧基苯載脂蛋白B

釀酒酵母 氮芥鹽鹽載脂蛋白B1

黑靈芝 5-溴噻吩-2-磺酰載脂蛋白B100

兩粵黃檀根瘤 5-溴-2-乙氧基吡啶載脂蛋白C2

灰藤黃鏈霉 3-基硅氧基-1-炔載脂蛋白C3

南方散斑殼 3-氨基-5-叔丁基異惡唑載脂蛋白E

瓜類* 2,3,4,5-四氟載脂蛋白M

中國臺灣根霉 鹽倍他汀增殖核抗原

盤長孢狀盤孢 蘇尼替尼增殖核抗原抗體

鐘器腐霉 乙鹽鹽粘蛋白;粘液5B

黃曲霉 2-甲基-3-呋喃硫乙酯粘蛋白2

產紫青霉 2,5-二甲基-3-呋喃硫粘蛋白5AC

炭黑曲霉 促腎上腺皮質片段 (1-16), 人粘膠蛋白;肌腱蛋白C

噬瓊脂鏈卵 2-氟-5-羥基吡啶整合αM

 


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