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貨號 | FS-X10828 |
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中文名稱:HDAC6抑制劑
英文名稱:Tubastatin A Hydrochloride
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10828
產品介紹:
Tubastatin A Hydrochloride是一種有效的,選擇性的HDAC6抑制劑,IC50值為15nM,對其選擇性是HDAC8外的其他亞型的1000多倍。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1310693-92-5 別名:Tubastatin A HCl;TSA HCl 純度:97.32% 分子量:371.86 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
腐霉*人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白Anti-OR6J1 Antibody人透明質(HAase)
菊粉血桿菌大鼠糖皮質激受體αAnti-OR6Q1 Antibody人透明質(HAase)
褐離褶傘小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體αAnti-OR6K2 Antibody人天門冬基轉移(AST)
果生鏈核盤菌小鼠血小板衍生生長因子ABAnti-OR6S1 Antibody人天門冬基轉移(AST)
細鏈格孢大鼠Ⅳ型膠原Anti-OR6T1 Antibody人性磷(ACP)
殺真菌鏈霉菌人腦源性神經營養因子Anti-OR6P1 Antibody人性磷(ACP)
狹窄革菌大鼠己糖激Anti-OR7A Antibody人葡萄糖6磷異構(GPI)
耐鹽枝孢小鼠P選擇Anti-OR7C1 Antibody人葡萄糖6磷異構(GPI)
巨枝膝梗孢人白活化黏附因子Anti-OR7E5P Antibody人磷葡萄糖變位(PGM)
蠟葉曲霉小鼠L解Anti-OR7C2 Antibody人磷葡萄糖變位(PGM)
異常威克漢姆酵母大鼠糖原合成激Anti-OR89 Antibody人亮酰基肽(LAP)
根瘤菌人活化AAnti-OR8B2 Antibody人亮酰基肽(LAP)
青變色鏈霉菌人神經調節蛋白1Anti-OR8B4 Antibody人鏈激(SK)
多色節桿菌大鼠CXC趨化因子配體16Anti-OR8B2 Antibody人鏈激(SK)
季也蒙邁耶氏酵母小鼠可溶性CD30配體Anti-OR89 Antibody人核糖核(RNASE)
釀酒酵母大鼠高敏狀腺原Anti-OR8G1 Antibody人核糖核(RNASE)
復制因子A蛋白2#黑腐皮殼菌人神經上皮瘤細胞
Ras相關GTP結合蛋白抗體殼梭孢屬小鼠Lewis肺癌瘤株
RAS相關蛋白癌基因Rab14抗體#黑蔥花霉屬615小鼠樹突狀細胞肉瘤瘤株
環指蛋白148抗體#齒梗孢霉屬KM小鼠網織細胞肉瘤瘤株
HDAC6抑制劑根瘤屬 XLD瓊脂培養基瘦
星狀諾卡氏 亞硫鉍瓊脂培養基天門冬氨基轉移
小孢根霉須狀變種 三糖鐵瓊脂培養基透明質
綠淀粉鏈霉 麥康凱瓊脂培養基微管相關蛋白輕鏈3
草青霉 伊紅美藍瓊脂培養基(Levine)周期D1
阿伯丁沙門氏 -蛋白胨緩沖液胰島樣生長因子1
釀酒酵母 瓊脂培養基S腫瘤壞死因子α
線蟲被毛孢 RV肉湯(EP)轉化生長因子β受體1
疏棉狀嗜熱霉 甘露鹽瓊脂培養基坦布蘇病
傳染性支氣管炎病 酪蛋白胨大豆吐溫20培養基血紅蛋白
土曲霉原變種 大豆-干酪消化物瓊脂培養基狀腺原
諾卡氏 大豆-干酪消化物培養基甲狀腺
栗酒裂殖酵母 BairdParker瓊脂基礎促腎上腺皮質
冠突曲霉 溴化十六烷基三瓊脂培養基總甲狀腺
多黏類芽孢桿 假單胞瓊脂培養基F組
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