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貨號 | FS-X11027 |
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培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:CK1抑制劑(IC261)
英文名稱:IC261
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X11027
產品介紹:
IC261是一種新型CK1抑制劑,作用于細胞有絲分裂,IC261抑制CK1,IC50值為16μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:186611-52-9 純度:98.97% 分子量:311.33 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
平菇—8804Pseudomonas stutzeri大鼠胃腸癌標志物CA199
枯草芽孢桿菌枯草亞種Pseudomonas stutzeri大鼠血紅氧合1(HO-1)
枯草芽孢桿菌Pseudomonas stutzeri大鼠血紅氧合1(HO-1)
聚多曲霉Pseudomonas stutzeri大鼠磷脂A2(PL-A2)
黑曲霉Pseudomonas stutzeri大鼠磷脂A2(PL-A2)
香菇Pseudomonas stutzeri大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)
大腸埃希菌Pseudomonas stutzeri大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)
橘青霉Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白5(AQP-5)
波蘭青霉Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白5(AQP-5)
細孢毛霉Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白4(AQP-4)
枯草芽孢桿菌Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白4(AQP-4)
綠色木霉Pseudomonas syringae大鼠水通道蛋白3(AQP-3)
無Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白3(AQP-3)
葡萄座腔菌Pseudomonas stutzeri大鼠水通道蛋白1(AQP-1)
枯草芽孢桿菌Pseudomonas synxantha大鼠水通道蛋白1(AQP-1)
異常威克漢姆酵母Pseudomonas syringae大鼠水通道蛋白0(AQP-0)
腦質膜單胺轉運蛋白PMAT抗體銀白離褶傘鎂(Mg)比色法測試盒
白細胞介1受體相關蛋白抗體長根菇鋅(Zn)比色法測試盒
多配體聚糖4抗體洛巴伊口蘑(金福菇)鉀離子(K)比濁法測試盒
血小板源性生長因子D脊髓源性生長因子B桃紅側耳銅(Cu)比色法測試盒
CK1抑制劑(IC261)Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum 衛矛羰堿
葡萄座腔 地骨皮乙
枯草芽孢桿 白麻
葡萄痂圓孢 新堿
金針菇FV908 30-羥基藤黃
寡孢鏈霉 9S-alpha-羥基表藤黃
大理石奇異球 9R-alpha-羥基表藤黃
尖頭蟲草 異藤黃
靈芝 新藤黃
黃楊痂圓孢 異新藤黃
異常威克漢姆酵母 藤黃
華根霉 2alpha-羥基-3beta-乙酰白樺
釀酒酵母 澤拉木
枯草芽孢桿 A
土壤類芽孢桿 表沒食子兒茶3-O-(3''-O-甲基)沒食子酯
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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