實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

PCR技術的定量原理：
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擴增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的，隨著反應循環數的增加，最終PCR反應不再以指數形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據最終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
服務流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
Colletotrichum indicum Dastur, anamorph名稱: 人肝癌；Hep3B2.1-7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Desulfosporosinus orientis (Campbell and Po ..名稱: 人臍靜脈融合；EA.hy926 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人肝母瘤；HuH-6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosen ..名稱: 人非小肺癌；HCC827 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Blastomyces dermatitidis Gilchrist et Stokes名稱: 小鼠顱蓋成纖維；OP9 α－MEM：AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)10%FBS

Podoxyphium indicum Sharma et al.名稱: 人胃癌；NCI-N87[N87] RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Candida boidinii Ramirez, anamorph名稱: 人胃腺癌；AGS RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Polysphondylium asymetricum Vadell et Caven ..名稱: 人肺腺癌；NCI-H1395 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Achlya bisexualis Coker名稱: 人喉癌；LCC RPMI1640(w/oHepes)15%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人胃癌；MKN-28 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Chaetomium trilaterale Chivers var.trilat ..名稱: 人內膜低分化腺癌；EAG3 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS

Candida albicans (Robin) Berkhout名稱: 人結直腸腺癌長春新耐藥株；HCT-8/V RPMI1640(w/oHepes)10%FBS+2000ng/ml長春新

Klebsiella pneumoniae名稱: 小鼠肺成纖維樣；C57/B6-L DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Homo sapiens, human名稱: 小鼠皮膚成纖維樣；C57/B6-S DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人內膜異位癥患者在位內膜間質永生化；hEM15A DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)15%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: SV40轉染人成骨；hFOB1.19 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS+300ng/mlG418
廣州管圓線蟲核酸檢測試劑盒人輪狀病(RV)IgMELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產品規格:48T/96T。

人腺病IgG(ADV-IgG)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產品規格:48T/96T。

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人流感病抗體IgG(FLU)ELISA試劑盒sICAM-1ELISAKit產品規格:48T/96T。

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