細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：中國倉鼠卵巢細胞    

產品英文：CTLA4 IG-24

貨號：FS-01X9737

細胞培養條件：DMEM+10%FBS+0.2mM氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人胸腺活化調節趨化因子(TARC/CCL17)ELISA試劑盒 英文名稱：Human thymus activation regulated chemokine,TARC ELISA Kit規格:96T/48T

人神經細胞粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Neural cell adhesion molecule ligand 1,NCAM-L1 ELISA Kit規格:96T/48T

人可溶性凋亡相關因子配體(sFASL)ELISA試劑盒英文名稱：Human soluble Factor-related Apoptosis ligand,sFASL/Apo-1 ELISA Kit規格:96T/48T

人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒英文名稱：Human inhibitor of apoptosis,IAP ELISA Kit規格:96T/48T

人γ干擾誘導單核細胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA試劑盒英文名稱：Human monocyte interferon gamma inducing factor,MIGF ELISA Kit規格:96T/48T

人干擾誘導T細胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA試劑盒英文名稱：Human Interferon inducible T-cell Chemoattractant,I-TAC ELISA Kit規格:96T/48T

人CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒英文名稱：Human cluster Of differentiation,CDl4 ELISA Kit規格:96T/48T

人白細胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒英文名稱：Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISA Kit規格:96T/48T

人CD4分子(CD4)ELISA試劑盒英文名稱：Human cluster Of differentiation,CD4 ELISA Kit規格:96T/48T

人CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒英文名稱：Human CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISA Kit規格:96T/48T

人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒英文名稱：Human CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA Kit規格:96T/48T

人γ干擾誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒英文名稱：Human interferon-inducible protein 16,IFI16/p16 ELISA Kit規格:96T/48T

人基質細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒英文名稱：Human Stromal cell derived factor 1a,SDF-1a ELISA Kit規格:96T/48T

人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒英文名稱：Human soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit規格:96T/48T

人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒英文名稱：Human Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA Kit規格:96T/48T

人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒英文名稱：Human Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA Kit規格:96T/48T

人干擾誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒英文名稱：Human interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit規格:96T/48T

人巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒英文名稱：Human macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA Kit 規格:96T/48T
中國倉鼠卵巢細胞NPD014  1號染色體開放閱讀框63抗體規格: 0.1ml

RBP/Retinol binding protein  結合蛋白抗體規格: 0.1ml

PMCA1  細胞膜鈣ATP1抗體規格: 0.2ml

CDH11/OB-Cadherin  鈣粘附蛋白-11抗體規格: 0.1ml

Lin-28B  RNA結合蛋白LIN28B抗體規格: 0.2ml

HSP1/Protamine P1  P1抗體規格: 0.2ml

EGR3  早期生長反應蛋白3抗體規格: 0.1ml

SOX10  轉錄因子SOX10抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。