當前位置:上海撫生實業有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TESF人紅細胞刺激因子ELISA試劑盒實驗原理
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
產品名稱 | ESF人紅細胞刺激因子ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human erythropoiesis stimulating factor, ESF Elisa Kit |
貨號 | FS-H63224 |
公司“質量是企業是生命之源”,選購優勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Aspergillus│usamii var. 宇佐美曲霉變種Aspergillus│usamii var.凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0015生長條件:28-30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Lactobacillus│buchneri 布氏乳桿菌Lactobacillus│buchneri分離基物:青貯飼料凍干物安全等級:1模式菌株:no制作青貯飼料。CM0006生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Lactobacillus│sp. 乳桿菌屬Lactobacillus│sp.分離基物:馬奶凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0006生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Streptococcus│sp. 鏈球菌屬Streptococcus│sp.分離基物:稀奶油凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0005生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Lactococcus│garvieae 格氏乳球菌Lactococcus│garvieae分離基物:成熟奶凍干物安全等級:1模式菌株:no發酵奶CM0005生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:97%
Lactococcus│lactis subsp. cremoris 乳乳球菌乳脂亞種Lactococcus│lactis subsp. cremoris分離基物:開菲爾粒凍干物安全等級:1模式菌株:no開菲爾發酵劑CM0005生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:97%
Candida│guilliermondii 季也蒙假絲酵母Candida│guilliermondii凍干物安全等級:1模式菌株:no用于白酒釀造研究。CM0077生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:97%
Hansenula│anomala var. anomala 異常漢遜酵母異常變種Hansenula│anomala var. anomala凍干物安全等級:1模式菌株:no用于清香型白酒的釀造研究。CM0077生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:≥99.99% metals basis
ESF人紅細胞刺激因子ELISA試劑盒實驗原理酵母葡萄糖霉素瓊脂(YDC)人心臟成纖維肺微血管內皮Annexin Ⅲ peptide 膜粘連蛋白A3抗體
CVT瓊脂培養基人心臟成纖維-心室肺血管平滑肌TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金屬蛋白酶組織抑制因子-2(抗原)
麥康凱肌阿東羧芐青霉素瓊脂基礎(MIAC)人心臟成纖維-心房II型肺泡上皮TIMP-3(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3) 金屬蛋白酶組織抑制因子(抗原)
腸球菌瓊脂(膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂)人角膜上皮氣管上皮Proinsulin 胰島素原
腸球菌肉湯人角膜氣道平滑肌ADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質素受體(抗原)
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基人視網膜內皮肺成纖維PAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子
膽汁七葉苷瓊脂(BEA)人視網膜色素上皮支氣管上皮CK7 角蛋白7
濾膜腸球菌瓊脂人晶狀體上皮支氣管成纖維VTG(vilogenin) 青鳉魚卵黃蛋白
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
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