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貨號	FS-X10449

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：FAK抑制劑(PND-1186)

英文名稱：PND-1186

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10449

產品介紹:

英文名稱：PND-1186

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

PND-1186可逆地抑制FAK活性，IC50為1.5nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1061353-68-1

別名：SR-2516;VS-4718

純度：99.71%

分子量：501.5

結構式：

PND-1186結構式

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸埃希菌G蛋白偶聯受體p2y12抗體Anti-CFP Antibody淀粉樣前體蛋白(APP)

糙皮側耳G蛋白偶聯受體p2y8抗體Anti-CHAT Antibody次級淋巴組織趨化因子6Ckine(CCL21)

黑曲霉G蛋白偶聯受體p2y9抗體Anti-CGRPR(CALCRL) Antibody成纖維生長因子9(FGF9)

松球殼孢菌蛋白酪磷相互作用蛋白51抗體Anti-CHAT Antibody成纖維生長因子23(FGF-23)

黑根霉菌內皮纖溶原激活抑制蛋白1抗體Anti-CHAT Antibody成纖維生長因子23(FGF23)

盤長孢狀盤孢前列腺相關P抗原家族成員1抗體Anti-CHAT Antibody層粘連蛋白(Laminin)

香蕉生假絲酵母磷化酪抗體Anti-CHAT Antibody層連蛋白(Laminin)

果生鏈核盤菌豬藍耳病病M蛋白抗體Anti-CHD2 Antibody表皮生長因子受體2(sp185/Her2)

長谷川赤擔孢酵母橋粒斑菲蛋白1抗體Anti-CHD2 Antibody表皮生長因子受體2(Her2)

地錘菌屬突觸樣蛋白1抗體Anti-CHEK2 Antibody表皮生長因子受體(EGFR/ErbB1)

紅曲霉蛋白調解因子6抗體Anti-CHEK1 Antibody表皮生長因子受體(EGF-R)

樟疫霉神經叢蛋白B3抗體Anti-CHGA Antibody表皮生長因子受體(EGFR)

阿舒假囊酵母PHD指蛋白21A抗體Anti-CHEK2 Antibody半乳糖凝集3(Galectin-3)

鏈球菌(不定種)富含脯蛋白11抗體Anti-CHI3L1 Antibody半乳凝3(GAL-3)

枯草芽孢桿菌三磷腺受體受體P2X3抗體Anti-CHEK2 Antibody(PB0732)半乳凝3(GAL3)

異常威克漢姆酵母相關血漿蛋白A抗體Anti-CHM Antibody白介8(IL-8)

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規格：0.98

費氏中華根瘤菌Sinorhizobium│fredii 質量規格：>98.5%,BR

嗜麥芽寡養單胞菌Stenotrophomonas│maltophilia 質量規格：>99%,二肽肽-4(DPP-4)抑制劑
FAK抑制劑(PND-1186)非洲哈茨木霉 4-氟葡萄糖氧化

奇異變形 2-氟-4-羥基苯甲敏感性脂肪

鹽城海桿二(2,6,10-十二碳三烯-1,12-二基)釕(IV)脂蛋白酯

半軟干酪居真細 1,5-環辛二烯(六氟乙酰酮)(I)銥肝脂

大腸埃希氏桿 4-氟苯基苯乙酮強啡肽

灰黃青霉 5-溴異喹啉血管緊張轉換抑制劑

枯草芽孢桿甲基烯二環戊基酯脂肪β氧化

雞油 2-三氟甲基喹啉二酰基甘油酰基轉移

冠突曲霉 1-[3-(trifluoromethoxy)phenyl]ethanol硫角質

環狀芽孢桿 5-羥基-1-茚酮鳥核交換因子4

葡萄座腔 (R)-(-)-3-甲基-2-丁鳥核交換因子4

多粘類芽孢桿 2,2′-聯嘧啶肥大β類胰蛋白

蘇云金芽孢桿 4-溴苯甲砜Rhodes激

枯草芽孢桿 2-(4-溴苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶線粒體呼吸鏈復合物IV

果生鏈核盤 2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲線粒體呼吸鏈復合物V
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)