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貨號	FS-X10269

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：GSK-3α/β抑制劑(CHIR-99021)

英文名稱：CHIR-99021

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10269

產品介紹:

英文名稱：CHIR-99021

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

CHIR-99021是一種GSK-3α/β抑制劑，IC50為10nM/6.7nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：252917-06-9

別名：CT99021

純度：99.92%

分子量：465.34

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

枯草芽孢桿菌干擾alpha/beta 受體1蛋白抗體Human RNF151 鳥類催乳(PRL/LTH)免疫試劑盒

犁頭霉屬干擾gamma受體1蛋白抗體Human RNF125 鳥H5N1 IgG抗體ELSIA 試劑盒

枯草芽孢桿菌真核翻譯起始因子3亞基L蛋白抗體Human RNF133 獼猴骨特異性堿性磷B(ALP-B)免疫試劑盒

黑曲霉干擾誘導的三角形四肽重復蛋白2抗體Human RNF135 家蠶卵黃蛋白(LT)免疫試劑盒

賴芽胞桿菌屬干擾誘導的三角形四肽重復蛋白1B抗體Human RNF167 鯽魚卵黃蛋白原(VTG)免疫試劑盒

棉盤孢160kDa內含子結合蛋白抗體Human RNF150 核黃轉運因子3(RFT3)免疫試劑盒

蘋果黑腐皮殼Bruton酪激抑制劑蛋白抗體Human RNF168 核黃轉運因子2(RFT2)免疫試劑盒

曲霉γ干擾誘導蛋白IP30抗體Human RNF212 核黃轉運因子1(RFT1)免疫試劑盒

擴展青霉中間絲家族孤啡肽1蛋白抗體Human RNF17 核二磷激A(NDPK-A)免疫試劑盒

金灰青霉內臟器官發育轉位相關蛋白NPH2抗體Human KIAA1377(Uncharacterized protein KIAA1377) 蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原(Vtg)免疫試劑盒

裂褐層孔菌胰島受體β抗體Human RNF10 大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)免疫試劑盒

茯苓內皮凝集HL1抗體Human RND3 Zeranol(玉赤霉)免疫試劑盒

閃光須霉干擾α抗體Human RLBP1L2 Trenbolone(侖諾)免疫試劑盒

曲霉白介-17F抗體Human RLBP1 Sulphaquinoxaline(磺喹噁林)免疫試劑盒

谷棒桿菌白介6抗體(N端)Human RLIM Sulphamethazine(磺二甲嘧啶)免疫試劑盒

香草蘭根疾白介6抗體Human RMI1 Sulphadiazine(磺嘧啶)免疫試劑盒

谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質量規格：分析標準品膽紅

埃及枝頂孢Acremonium│egyptiacum 質量規格：>75.0%(GC)根皮

直德氏霉Drechslera│directa 質量規格：>95.0%(GC)蟾靈
GSK-3α/β抑制劑(CHIR-99021)黑腐皮殼 8-甲氧基-2-甲基喹啉屋塵螨變應原Derp1 IgG抗體

衛矛擬盤多毛孢 2-氨基-5-溴-4-甲基噻唑C-C趨化因子6

細鏈格孢 4-乙炔基甲酯肌漿;內質網鈣ATP

蘋果鏈格孢 2-溴-3-(2-乙基己基)噻吩腦啡肽

小青霉 1,4-二氧六環-2-酮凝集

雙孢蘑菇 3-氟-4-溴-苯乙酮酪蛋白激2

大腸埃希 4-乙炔基苯RGD三肽

青色鏈霉 1-嘧啶2--4-羧癌標志物-CA153

褐疣柄牛肝 2,4-二-5-氟苯屋塵螨變應原Derp1 IgE抗體

枯草芽孢桿 3-甲氧基烯甲酯泛樣修飾因子激活1

新城疫病 3'-苯酮胰島樣生長因子結合蛋白5

黑曲霉 3-氨基-3-(3,4-二甲氧基苯基)IV型前膠原

裂褶 3-溴-4-甲氧基苯甲20S蛋白體

木拉克酵母屬 (S)-1-氨基-3--2-鹽鹽CD200分子

雞痘病叔丁基磺酰過氧化4
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)