當前位置:上海撫生實業有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 48T 0.1PCR管轉基因玉米品系5307核酸檢測試劑盒
參數規格:
產品名稱:轉基因玉米品系5307核酸檢測試劑盒
產品規格:48T 0.1PCR管
產品貨號:FS-P10748
產品分類:熒光探針法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
-1549℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
中國臺灣假單胞菌近海細菌模式菌株: no沉積物/池塘水草根淤泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 471生長條件: 25℃
范麗德巴利酵母培養基: 33模式菌株: no醬油沉淀物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他
糙梗青霉生長條件: 25℃培養基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
蘇云金芽孢桿菌日本亞種培養基: 266對比、研究、分析作對比標準株提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法
利文斯頓島希瓦氏菌培養基: 471微生物/耐冷菌水樣/海冰提供形式: 斜面培養物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
樟疫霉培養基: 14模式菌株: no根系提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 25-27 定期移植法
-1550℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
草莖點霉培養基: CM0014模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 26C -80℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
不動桿菌屬培養基: CM0002模式菌株: no冬蟲夏草菌膜提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
蘇云金芽胞桿菌培養基: 0002模式菌株: no含笑提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結法
深綠木霉生長條件: 25℃,好氧枯枝模式菌株: 未知培養基: PDA
蔥頭假單孢菌生長條件: 30℃培養基: 14提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結法
耐久腸球菌研究分析模式菌株: no乳汁提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: 396生長條件: 37
-1551℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
370041 z4,z23 -模式菌株: no種屬: Salmonella│waycross提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: CM0051生長條件: 37℃
山麥冬皂苷BAnti-HMGA1 (high mobility group AT-hook 1) 高遷移率族蛋白A1抗原TRPM6 瞬時受體電位離子通道蛋白6抗體(M亞家族)
亞麻木酚素SDGHMGA2 (high mobility group A2) 高遷移率族蛋白A2抗原TRPM5 瞬時受體電位離子通道蛋白5抗體(M亞家族)
α-倒捻子素HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1) 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原TRPM4 瞬時受體電位離子通道蛋白4抗體(M亞家族)
β-倒捻子素HO-1/HSP32(Hemeo xygenase 1) 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原TRPM3 瞬時受體電位離子通道蛋白3抗體(M亞家族)
3-異倒捻子素HO-2(Heme oxygenase 2) 血紅素氧合酶-2抗原TRPM2 瞬時受體電位離子通道蛋白/M亞家族抗體
菊苣phospho-HP1/heterochromatin protein 1 (pTyr24)(fruit fly) 異染色質蛋白1(磷化多肽)TRPM1 瞬時受體電位離子通道蛋白1抗體(M亞家族)
梭砂貝母堿phospho-heterochromatin protein 1 (pTyr41)peptide 異染色質蛋白1(磷化多肽)TRPC6 瞬時受體電位離子通道蛋白6抗體
地膚子皂苷IcHPV16-E6/E6 protein(Human papillomavirus type 16) 人類乳頭狀瘤病16抗原TRPC3 色氨相關蛋白3抗體
大薊苷柳穿魚葉苷HPV18 E6 人類乳頭狀瘤病18E6TRP2 酪氨酶相關蛋白2抗體
2”-O-沒食子?;鸾z桃苷HPV16-E7/E7 protein(Human papillomavirus type 16) 人類乳頭狀瘤病16抗原TRP1/gp75 酪氨酶相關蛋白1抗體
轉基因玉米品系5307核酸檢測試劑盒Zopiclone 佐匹克隆(標準品) 質量規格:>98%(T),BR
Aniracetam 阿尼西坦,回拉西坦;茴拉西坦 質量規格:>98%(T),BR
Aniracetam 阿尼西坦(標準品) 質量規格:>98%(T),標準品
L-Glutamine L-谷氨酰胺 質量規格:>98%(T),標準品
Roflumilast 羅氟司特 質量規格:>98%(T),進口原裝
Roflumilast 羅氟司特(標準品) 質量規格:>98%(TLC),BR
Adenosinetriphosphate 5'-三磷腺苷(ATP) 質量規格:>98%(滴定)
Brinzolamide 布林佐胺 質量規格:>98%,10mg/ml,進分
Brinzolamide 布林佐胺(標準品) 質量規格:>98%,5-HT2A高效選擇性激動劑
Ronidazole 羅硝唑 質量規格:>98%,ALK抑制劑
Ronidazole 羅硝唑(標準品) 質量規格:>98%,ALK抑制劑
Ethylcellulose 乙基纖維素 質量規格:>98%,AMPK選擇性抑制劑
VitaminK1 維生素K1 質量規格:>98%,AR
9-Amino-minocyclineHCl 9-氨基米諾環素鹽鹽 質量規格:>98%,AR
Afatinib/BIBW2992 阿法替尼 質量規格:>98%,AR
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
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