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貨號 | FS-X10943 |
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中文名稱:γ-分泌酶抑制劑(YO-01027)
英文名稱:YO-01027
產品規格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg
貨號:FS-X10943
產品介紹:
YO-01027(Dibenzazepine;DBZ)是高效的γ-分泌酶抑制劑,裂解Notch和APPL的IC50分別為2.92±0.22和2.64±0.30nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:209984-56-5 別名:Dibenzazepine;DBZ 純度:98.22% 分子量:463.48 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
膠孢人ras同源物基因家族成員bLysinibacillus sphaericus小鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TGSF)
團炭角菌人假定蛋白LOC677340Bacillus sp.小鼠羥脯(Hyp)
紫色直絲鏈霉菌人假定蛋白LOC433328Bacillus sp.小鼠羥脯(Hyp)
鏈格孢菌人髓樣分化因子初次應答基因88Lysinibacillus sphaericus小鼠骨保護配體(OPGL)
果生鏈核盤菌人干擾活化基因205Lysinibacillus sphaericus小鼠骨保護配體(OPGL)
擬盤多毛孢人組織相容性2-K1-K 區Lysinibacillus sphaericus小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)
兔出血癥病人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4Lysinibacillus sphaericus小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)
假單孢菌人C型凝集結構域家族4成員ELysinibacillus sphaericus小鼠抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)
蘇云金芽孢桿菌人假定蛋白LOC677168Lysinibacillus sphaericus小鼠抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)
Malassezia cuniculi人淋巴抗原6復合物基因座ALysinibacillus sphaericus小鼠鐵蛋白(FE)
褐囊蜜環菌人嗜性白血球相關之RNA水解酵家族成員1Lysinibacillus sphaericus小鼠鐵蛋白(FE)
釀酒酵母人混合系列蛋白激樣結構域Lysinibacillus sphaericus小鼠碳酐2(CA-2)
固氮菌人過氧化物體增殖激活物受體γ輔激活因子1αLysinibacillus sphaericus小鼠碳酐2(CA-2)
豇豆慢生根瘤菌人類似cDNA順序BC027382Lysinibacillus sphaericus小鼠色上皮衍生因子(PEDF)
松口蘑人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因Lysinibacillus sphaericus小鼠色上皮衍生因子(PEDF)
詹氏桿菌人REST協阻抑因子3Lysinibacillus sphaericus小鼠解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)
鋅指蛋白X染色體蛋白抗體暗褐網柄牛肝菌草魚魚鰾上皮樣細胞系
鋅指蛋白744抗體小克銀漢霉表達HP6H8抗體的中國倉鼠卵巢細胞株
鋅指蛋白ZBBX抗體酒香酵母牛甲狀腺細胞系
鋅指蛋白575抗體疣孢青霉猴胎腎細胞
γ-分泌酶抑制劑(YO-01027)黑木耳 二苯并噻吩三磷腺
異配囊接霉卵孢變種 磺苯甲酰磺嘧啶
西溪土土地桿 磺乙酰鈉單不飽和脂肪
豌豆根瘤 磺二甲氧嘧啶多不飽和脂肪
鍺栓孔 2,6-二苯脂聯
黑曲霉 苯佐抵抗
類芽孢桿屬 去甲替林鹽鹽膽囊收縮
產黃青霉 鹽阿替林甘油三酯
阿爾賓娜鞘氨單胞 1-氨基環烷羧高密度脂蛋白
空腸彎曲桿* 4-松油低密度脂蛋白
芽胞桿 泰妙游離脂肪
根瘤 麥芽五糖糖化血紅蛋白
大球蓋菇 β-丁香烯末端糖基化
密蘇里游動放線
腐皮鐮孢 甲芬那黑色
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