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貨號 | FS-X10355 |
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中文名稱:BET bromodomain抑制劑(GSK525762A)
英文名稱:GSK 525762A
產品規格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10355
產品介紹:
英文名稱:GSK 525762A 產品規格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg GSK525762A是一種BET bromodomain抑制劑,IC50為32.5-42.5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1260907-17-2 別名:I-BET 762 純度:99.85% 分子量:423.9 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
大腸桿菌磷化蛋白激C底物Marcks抗體Human INTS3(IntegRator complex subunit 3) 顆粒體蛋白(GRN)
弗氏志賀氏菌磷化蛋白激C底物Marcks抗體Human GPX1(Glutathione peroxidase 1) 顆粒溶(GNLY)
地衣芽胞桿菌肝生長因子受體抗體Human GPT2(Alanine aminotransferase 2) 顆粒H(GZMH/CGL2/CTSGL2)
產色鏈霉菌磷化絲裂原活化蛋白激3K9抗體Human EPB42(Erythrocyte membrane protein band 4.2) 顆粒B(Gzms-B)
黃曲霉受體酪激抗體Human LPO(Lactoperoxidase) 顆粒A(Gzms-A)
蠟狀芽孢桿菌絲裂原活化蛋白激3K9抗體Human SESN3(Sestrin-3) 人抗組織轉谷酰抗體IgA(tTG-IgA)
尖孢鐮刀菌黑皮質3受體抗體Human CTSK(Cathepsin K) 人抗組蛋白抗體(AHA)
假單胞菌屬Menin抑癌蛋白抗體Human SERPINH1(Serpin H1) 人抗內膜抗體(EMAb)
異常威克漢姆酵母錯配修復蛋白3抗體Human MAT1A(S-adenosylmethionine synthase isoform type-1) 人抗滋養膜抗體(ATA)
馬勃微小染色體維持缺陷蛋白7抗體Human DEFB103A(Beta-defensin 103) 人抗中性粒顆粒抗體(ANGA)
伊氏副球菌單核趨化蛋白2抗體(小鼠)Human ACAT1(Acetyl-CoA acetyltransferase, mitochondrial) 人抗中性粒抗體(ANA)
洋蔥伯克霍爾德氏菌單核趨化蛋白3抗體Human ITGAV(Integrin alpha-V) 人抗中性粒核周抗體(pANCA)
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)單核趨化蛋白3抗體Human KLK2(Kallikrein-2) 人抗中性粒胞漿抗體(cANCA)
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)巨噬炎癥蛋白18抗體Human ETFDH(Electron transfer flavoprotein-ubiquinone oxidoreductase, mitochondrial) 人抗中性粒/中心體抗體(ACA)
棱蓋多孔菌MITF相關轉錄因子抗體Human PCCB(Propionyl-CoA carboxylase beta chain, mitochondrial) 人抗著絲點抗體(ACA/CENP)
梨黑斑鏈格孢雷帕霉靶蛋白抗體Human PENK(Proenkephalin-A) 人抗著絲點抗體(ACA)
鵝艾美耳球蟲Eimeria│anseris 質量規格:>98%
暗產色鏈霉菌Streptomyces│phaeochromogenes 質量規格:1:12000,BR芹菜
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規格:≥30units/mg protein,sigma分裝莽草
BET bromodomain抑制劑(GSK525762A)木拉克酵母屬 N-芐基奎寧[手性相轉移催化劑]卵巢癌標志物
燕麥嗜西瓜亞種* N-芐基化喹啶嗡[手性相轉移催化劑]
硬柄皮傘 N-芐基化辛可寧丁膽固酰基轉移
白地霉 (+)-4,5-雙[羥基(二苯基)甲基]-2-甲基-2-苯基-1,3-二氧戊環卵清蛋白特異性IgE
樹劍 (-)-4,5-雙[羥基(二苯基)甲基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環卵清蛋白特異性IgG
紅曲霉 (R)-(+)-1-芐基-3-吡咯烷卵清蛋白特異性IgG1
疣孢馬杜拉放線 (R)-4-芐基噻唑啉-2-硫酮錳超氧化物歧化
根霉 N-Boc-反式-4-氟-L-脯甲酯糜蛋白
洋蔥曲霉 (S,S)-1,2-雙[(叔丁基)甲基膦]乙烷[η-(2,5-二環庚二烯)]合四氟銠(I)球蛋白A
節桿 (+)-4,5-雙[羥基(二苯基)甲基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環球蛋白E
翹鱗傘 Boc-4--L-苯球蛋白G
熱帶假絲酵母 (S)-N-BOC-4-溴苯球蛋白G1
棒桿屬 2-甲基3-(三氟甲基)球蛋白G2a
巴西果小克銀漢霉 4--3-(三氟甲基)芐球蛋白M
片球屬 5-降烯-2-羧甲酯(內型和外型的混和物)繆勒管抑制物質;抗繆勒管
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