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貨號	FS-X10357

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：乳腺癌耐藥蛋白抑制劑(BCRP抑制劑)

英文名稱：Ko 143

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10357

產品介紹:

英文名稱：Ko 143

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

Ko143是一種有效的乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)抑制劑，EC90值為26nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：461054-93-3

純度：99.9%

分子量：469.57

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

膠韌革菌(榆耳，榆蘑)磷化絲裂原活化的蛋白激p38β抗體Human KLF13(Krueppel-like factor 13) 人抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)

異常漢遜酵母磷化自噬微管相關蛋白輕鏈3抗體Human MYH9(Myosin-9) 人抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)

聚多曲霉粘蛋白-5B抗體Human AMSH(alpha-MSH) 人抗心肌抗體(AMA)

矩圓黑盤孢粘蛋白-3抗體Human KLF14(Krueppel-like factor 14) 人抗小鼠抗體(HAMA)

馬克斯克魯維酵母雞馬立克氏病火雞皰疹病抗體Human THBS4(Thrombospondin-4) 人抗線粒體抗體M2亞型(AMA-M2)

三骨菇多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體(C端)Human CRHR2(Corticotropin-releasing factor receptor 2) 人抗線粒體抗體(AMA)

雜色曲霉抗體Human IL17RB(Interleukin-17 receptor B) 人抗膜DNA抗體(cmDNA)

中華芽孢桿菌黑色瘤相關抗原4抗體Human GPT(Alanine aminotransferase 1) 人抗胃壁抗體(AGPA/PCA)

枯草芽孢桿菌鈣結合蛋白39抗體Human VGF(Neurosecretory protein VGF) 人抗網硬蛋白抗體(ARA)

山楂生葉點霉線粒體抗病信號MAVS蛋白抗體Human GALNS(N-acetylgalactosamine-6-sulfatase) 人抗唾液腺導管組織抗體(SDA)

巴氏醋桿菌巨噬集落激因子受體抗體Human FBLN5(Fibulin-5) 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)

產短桿菌腫瘤轉移相關蛋白1抗體Human MUC21(Mucin-21) 人抗突觸前膜抗體(PsmAb)

葡紫紅菇粘蛋白4抗體Human SERPINA6(Corticosteroid-binding globulin) 人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)

紫紅曲霉三聚抗體Human NR1H2(Oxysterols receptor LXR-beta) 人抗突變型瓜波形蛋白抗體(anti-MCV Ab)

凍土毛霉原變型磷化雷帕霉靶蛋白抗體Human UBR4(E3 ubiquitin-protein ligase UBR4) 人抗透明帶抗體(aZP)

三隔鐮刀菌黑皮質-1受體抗體Human CRYAB(Alpha-crystallin B chain) 人抗天然脫氧核糖核抗體(n-DNA-Ab)

美澳型核果褐腐病菌Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey 質量規格：≥90%,進分木犀草

香菇Lentinula│edodes 質量規格：≥99%,BR內酯

AS1.365=AS1.0365資源名稱: 大腸埃希氏菌質量規格：3萬U/g紅
乳腺癌耐藥蛋白抑制劑(BCRP抑制劑)根瘤 4-羧基-3-氟苯內皮型一氧化氮合

蘇云金芽孢桿肯尼亞亞種 3--5-氟苯內源性糖皮質

Paecilomyces formosus 4-羧基-3-苯內脂

福氏志賀氏 4-羧基苯頻哪酯內質網應激相關蛋白CHOP

金頂側耳 3-羧基苯頻哪酯黏著斑激

總狀共頭霉 2-頻哪酯鳥環化

層出鐮刀環基溴化鎂鳥脫羧

平菇環己基溴化鎂尿吡啶啉

大腸埃希 3-基二甲氧基硅烷尿蛋白

瓊氏不動桿二苯基-2-氨基乙酯尿二磷葡萄糖轉移

植物乳桿三正丁基疊氮化錫尿二磷葡萄糖轉移1

科氏葡萄球 4-氨酰苯尿二磷葡萄糖轉移2

靈芝 3-氨基苯鹽鹽尿肌酐

哈茨木霉 3-甲酰氨苯尿激型纖溶原激活物

葡萄座腔 5-乙酰基噻吩-2-尿皮質2
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)