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當(dāng)前位置：上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PRMT4和PRMT6雙重抑制劑(MS049)
| 貨號(hào) | FS-X10950 |
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培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱(chēng)：PRMT4和PRMT6雙重抑制劑(MS049)
英文名稱(chēng)：MS049
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號(hào)：FS-X10950
產(chǎn)品介紹:
MS049是一個(gè)強(qiáng)的，有選擇性的，有細(xì)胞活性的PRMT4和PRMT6雙重抑制劑，IC50分別是34nM和43nM。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號(hào)：1502816-23-0 純度：98.0% 分子量：248.36 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
黑曲霉人上皮中性?；罨?/span>78Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)
檸條根瘤菌人維生CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠克拉拉蛋白(CC16)
葡萄枯萎病菌人維生B6Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠克拉拉蛋白(CC16)
冷溫木拉克酵母人可溶性P選擇Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β半乳糖(βGAL)
少根根霉人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β半乳糖(βGAL)
小球狀少鹽芽孢桿菌人維生DBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎上腺(EPI)
石楠盤(pán)多毛孢人維生K1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎上腺(EPI)
酒紅鏈霉菌人維生B12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β甘露糖(β Manase)
大腸埃希氏菌人維生D3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β甘露糖(β Manase)
東方伊薩酵母人維生D2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠髓過(guò)氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌人維生EBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠髓過(guò)氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)
栗疫菌人維生ABacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β內(nèi)酰抑制劑(BLI)
磚紅鏈霉菌人鳥(niǎo)交換因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β內(nèi)酰抑制劑(BLI)
蒙地曲霉人維生D受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠一氧化氮(NO)
枯草芽孢桿菌人性休克綜合征1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠一氧化氮(NO)
淡水噬冷菌人金葡菌腸Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β萘(β-Nph)
鋅指蛋白ZBTB12抗體脆泊氏孔菌轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠睪丸支持細(xì)胞
鋅指蛋白924抗體粗柄蘑菇人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞
鋅指蛋白297抗體杯傘正常人胰管上皮細(xì)胞
鋅指蛋白23抗體斜蓋傘中國(guó)地鼠卵巢細(xì)胞-木糖基轉(zhuǎn)移I缺陷型
PRMT4和PRMT6雙重抑制劑(MS049)紫杉薄孔 二苯烷肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移1α
擬青霉 季戊四腺環(huán)化
擬莖點(diǎn)霉 四氫糠轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白
鴨疫里氏桿 透胰凝乳蛋白
白被黑蛋巢 1-辛膠原吡啶交聯(lián)
球毛殼 正庚雙A
枯草芽孢桿 環(huán)己白三烯B4
平菇 十六葉黃
鐮刀 十八胡蘿卜
蘇云金芽孢桿肯尼亞亞種 2-壬二酰
黑曲霉 1-壬胰凝乳蛋白
鏈格孢 苯甲游離轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白
波羅的海西瓦氏 3-苯肉堿脂酰轉(zhuǎn)移
曲霉 2-苯乙色P450 19A1B
*匍枝根霉 2,4,6-基吡啶S轉(zhuǎn)移
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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