細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：小鼠源基于MLV-10A1逆轉錄病毒包裝細胞系    

產品英文：PT-67

貨號：FS-01X9688

細胞培養條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )ELISA試劑盒Human skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA Kit

人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒Human Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 ELISA Kit

人25羥基D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒Human 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit

人骨特異性堿性磷B(ALP-B)ELISA試劑盒Human Bone-specific Alkphase B,ALP-B ELISA Kit

人骨鈣/骨蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒Human Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA Kit

人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand,sRANKL ELISA Kit

人1,25二羥基D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)ELISA試劑盒Human 1,25-dihydroxyvitamin D3,DVD/DHVD 3 ELISA Kit

人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒Human histon-H2b ELISA Kit

人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒Human Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA Kit

人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒Human Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA Kit

人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒Human Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA Ki

人甘露聚糖結合凝集相關蛋白(MASP)ELISA試劑盒Human mannan binding lectin associated serine protease,MASP ELISA Kit

人周期依賴性激7(CDK-7)ELISA試劑盒Human Cyclin-dependent kinase 7,CDK-7 ELISA Kit

人周期依賴性激2(CDK-2)ELISA試劑盒Human Cyclin-dependent kinase 2,CDK-2 ELISA Kit

人周期依賴性激1(CDK-1)ELISA試劑盒 Human Cyclin-dependent kinase 1,CDK-1 ELISA Kit

人磷化腺活化蛋白激(AMPK)ELISA試劑盒Human Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK ELISA Kit

人解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)ELISA試劑盒Human A Disintegrin And Metalloprotease 9,ADAM9 ELISA Kit

人β位淀粉樣前體蛋白裂解2(BACE2)ELISA試劑盒Human beta-site APP-cleaving enzyme 2,BACE2 ELISA Kit

人核磷化1(UPP1)ELISA試劑盒human uridine phosphorylase 1,UPP1 ELISA Kit
小鼠源基于MLV-10A1逆轉錄病毒包裝細胞系SynCAM  細胞粘附分子1抗體規格: 0.1ml

CADM3/IGSF4B  細胞粘附分子3抗體規格: 0.2ml

CAMTA1  鈣調蛋白結合轉錄激活因子1抗體規格: 0.2ml

CDC4/FBW7/SEL10  腫瘤抑制因子FBW7抗體規格: 0.2ml

CADM 4  細胞粘附分子4抗體規格: 0.2ml

DAB2IP  Dab2相互作用蛋白抗體規格: 0.2ml

DAB2  信號轉導功能磷蛋白DAB2抗體規格: 0.2ml

ADRB3/beta 3 Adrenergic Receptor  β3腎上腺能受體抗體規格: 0.1ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。