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產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
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適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9692 |
產品屬于:
產品名稱:小鼠雜交瘤
產品英文:SDOW-17
貨號:FS-01X9692
細胞培養條件:DMEM+10%FBS+1%P/S
生長狀態:懸浮生長
產品規格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養溫度(℃)37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 |
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人磷烯式丙羧激(PCK)ELISA試劑盒Human phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit
(trypsin)ELISA試劑盒 Human trypsin ELISA Kit
人β位淀粉樣前體蛋白裂解1(BACE1)ELISA試劑盒Human β-site APP-Cleaving Enzyme 1,1BACE1 ELISA Kit
人蛋白二硫化物異構前體(PDI)ELISA試劑盒Human Protein disulfide-isomerase precursor,PDI ELISA Kit
人蛋白二硫化物異構A3(PDIA3)ELISA試劑盒Human protein disulfide-isomerase A3,PDIA3 ELISA Kit
人山梨脫氫(SDH)ELISA試劑盒Human sorbitol dehydrogenase,SDH ELISA Kit
人基脯酰順反異構(PPI)ELISA試劑盒Human Peptidyl prolyl cis/trans isomerase,PPI ELISA Kit
人鳥基甲酰轉移(OCT)ELISA試劑盒Human ornithine carbamoyl transferase,OCT ELISA Kit
人內臟脂肪特異性蛋白抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒Human Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA Kit
人蛋白磷(PP)ELISA試劑盒Human Protein Phosphatase,PP ELISA Kit
人硫氧還蛋白還原(TrxR)ELISA試劑盒Human thioredoxin reductase,TrxR ELISA Kit
人天青殺(AZU)ELISA試劑盒 Human azurocidin,AZU ELISA Kit
人血管緊張A(ATA)ELISA試劑盒 Human Angiotensinase A,ATA ELISA Kit
人胰(PAMY)ELISA試劑盒 Human Pancreatic Amylase,PAMY ELISA Kit
人α烯化(αENOL)ELISA試劑盒 Human α-enolase,αENOL ELISA Kit
人膠原I(Collagenase I)ELISA試劑盒 Human Collagenase I ELISA Kit
人磷化蛋白激C(P-PKC)ELISA試劑盒Human phospho Protein Kinase C,P-PKC ELISA Kit
人酪羥化(TH)ELISA試劑盒 Human tyrosine hydroxylase,TH ELISA Kit
人多巴脫羧(DDC)ELISA試劑盒 Human dopamine decarboxylase,DDC ELISA Kit
小鼠雜交瘤CD66c/CEACAM6 癌胚抗原相關細胞粘附分子抗體規格: 0.2ml
CPA1/Carboxypeptidase A 胰羧A1抗體規格: 0.1ml
CPA2/Carboxypeptidase A2 羧A2抗體規格: 0.1ml
CPB1/Carboxypeptidase B1 胰羧B1抗體規格: 0.1ml
CPEB1 細胞質多聚腺結合蛋白1抗體規格: 0.1ml
Cystatin E/M 半蛋白抑制劑6抗體規格: 0.1ml
CRABP2 細胞維甲結合蛋白2抗體規格: 0.1ml
CST7/Cystatin F 半蛋白抑制劑7抗體規格: 0.1ml
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