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貨號	FS-01S63212

公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過產(chǎn)品，售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

規(guī)格：100管/48樣

檢測方法：微量法

貨號：FS-01S63212
商品介紹：

測定意義

NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷酰基供體進行磷酸化反應(yīng)，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。

測定原理：

NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH；NADPH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT），通過在600 nm下測定MTT的還原速度（吸光值的變化）可反映出NADK活性的大小。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
QQ截圖20220307153604.png

粗酶液提取：

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測。

組織因子途徑抑制因子(TFPI)聯(lián)免疫試劑盒梨形卷枝霉CaMKII-α (D10C11) Rabbit mAb

血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)聯(lián)免疫試劑盒假絲酵母屬TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

補體因子4 (C4)聯(lián)免疫試劑盒鼠李糖小短桿TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

鐵蛋白(FE)聯(lián)免疫試劑盒釀酒酵母SimpleChIP® Human CDKN1B Promoter Primers

球蛋白G(IgG)聯(lián)免疫試劑盒分枝桿SimpleChIP® Human EGR1 Intron 3 Primers

血清轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)聯(lián)免疫試劑盒蒙古口蘑DLST (D22B1) XP® Rabbit mAb

卵泡抑樣蛋白1(FSTL1)聯(lián)免疫試劑盒產(chǎn)氣莢膜梭 C型DLST (D22B1) XP® Rabbit mAb

賴酰氧化(LOX)聯(lián)免疫試劑盒鏈霉SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb

絨毛膜促性腺(CG)聯(lián)免疫試劑盒凍土毛霉ADAP Antibody

生長(GH)聯(lián)免疫試劑盒樟疫霉PhosphoPlus® Smad2 (Ser465/467) Antibody Duet

IV型膠原(COL4)聯(lián)免疫試劑盒印度芽孢桿MAML1 (D3E9) Rabbit mAb

纖維連接蛋白(FN)聯(lián)免疫試劑盒釀酒酵母Phospho-Stat3 (Tyr705) Blocking Peptide

白介9(IL-9)聯(lián)免疫試劑盒斑玉蕈Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)

I型前膠原(PCI)聯(lián)免疫試劑盒木蹄層孔Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (APC Conjugate)

III型前膠原(PCIII)聯(lián)免疫試劑盒枯草芽孢桿枯草亞種XPD (D3Z6I) Rabbit mAb
NADKNAD激酶檢測試劑盒微量法陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-1(人源）Anti-GAST Antibody大鼠白介12 p40（IL-12/p40）elisa定量檢測試劑盒