細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：主動脈瓣膜間質細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9790

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

人真核翻譯起始因子3a(eIF3a)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Eukaryotic translation initiation factor 3a,eIF3a ELISA Kit規格:96T/48T

人磷化細胞外信號調節激(pERK)ELISA試劑盒英文名稱：Human phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit規格:96T/48T

人受磷蛋白(PLN)ELISA試劑盒英文名稱：Human phospholamban,PLN ELISA Kit規格:96T/48T

人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子(TWEAK)ELISA試劑盒英文名稱：Human tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit規格:96T/48T

人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒 英文名稱：Human IPO-38 ELISA Kit規格:96T/48T

人切除修復交叉互補基因1(ERCC1)ELISA試劑盒英文名稱：human excision repair cross-complementation group 1,ERCC1 ELISA Kit規格:96T/48T

人磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒英文名稱：human phospho-inhibitory subunit of NF-κBα,pIKBα ELISA Kit 規格:96T/48T

人樁蛋白(Pax)ELISA試劑盒英文名稱：Human paxillin,Pax ELISA Kit規格:96T/48T

人小乳腺表皮粘蛋白(SBEM)ELISA試劑盒英文名稱：Human small breast epithelial mucin,SBEM ELISA Kit規格:96T/48T

人類似60S核糖體蛋白L21(LOC382344)ELISA試劑盒英文名稱：human Mus musculus similar to 60S ribosomal protein L12,LOC382344 ELISA Kit 規格:96T/48T

人類粘蛋白2(ORM2)ELISA試劑盒英文名稱：human orosomucoid 2,ORM2 ELISA Kit規格:96T/48T

人MAX二聚化蛋白1(mxd1)ELISA試劑盒英文名稱：human MAX dimerization protein 1,mxd1 ELISA Kit規格:96T/48T

人水閘蛋白14(CLDN14)ELISA試劑盒英文名稱：human claudin 14,CLDN14 ELISA Kit規格:96T/48T

人可溶性半乳糖結合凝集3(Lgals3)ELISA試劑盒英文名稱：human lectin-galactose binding-soluble 3,Lgals3 ELISA Kit規格:96T/48T

人主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒英文名稱：human major vault protein,MVP ELISA Kit規格:96T/48T

人泛蛋白D(UBD)ELISA試劑盒英文名稱：human ubiquitin D,UBD ELISA Kit規格:96T/48T

人toll樣受體2(TLR2)ELISA試劑盒英文名稱：human toll-like receptor 2,TLR2 ELISA Kit規格:96T/48T

人青少年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關蛋白2(HFE2)ELISA試劑盒 英文名稱：human hemochromatosis type 2/uvenile-uman homolog,HFE2 LISA Kit規格:96T/48T
主動脈瓣膜間質細胞GMCL1L  生殖細胞樣蛋白1樣蛋白抗體規格: 0.2ml

KLLN   Killin-p53調節復制抑制蛋白抗體規格: 0.2ml

HFREP1/FGL1  肝細胞源性纖維蛋白原相關蛋白1抗體規格: 0.2ml

Fibrinogen gamma chain  γ鏈抗體規格: 0.2ml

Fibrinopeptide B  纖維蛋白B抗體（血纖B）規格: 0.2ml

Mitochondrial ribosomal protein L11  線粒體核糖體蛋白L11抗體規格: 0.2ml

STK40  /蛋白激40抗體規格: 0.2ml

BOD1  雙向染色體細胞分裂蛋白1抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。