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MEK抑制劑(PD98059)

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更新時間:2022-05-18 10:46:34瀏覽次數:263次

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貨號 FS-X10276
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MMP-13 /FITC 熒光標記質金屬蛋白13抗體IgG十四烷溴化 99%
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中文名稱:MEK抑制劑(PD98059)

英文名稱:PD98059

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10276

產品介紹:

英文名稱:PD98059

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

PD98059是一種MEK抑制劑,IC50為5μM,也抑制TCDD結合到芳香烴受體(AHR),IC50為4μM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:167869-21-8

純度:99.45%

分子量:267.28

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

產氣腸桿菌(現1)抑制A/Inhibin α抗體Human RBM24(RNA Binding Motif Protein 24) 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體3(TRAIL-R3)

布魯氏菌雞傳染性喉氣管炎病糖蛋白E抗體Human RBMS2 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體2(TRAIL-R2/DR5)

不規則鹽海菌小腸型脂肪結合蛋白抗體Human RBM25 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)

金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)白介-7受體a抗體Human RBM26 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)

畫眉草彎孢整合α3抗體Human RBP2 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)

殼菌整合β5抗體Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)

枯草芽胞桿菌整合α1抗體Human RBMX2 腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)

紫紅曲霉白介2受體β鏈抗體 IL-2RβHuman RBM39 腫瘤壞死因子受體相關因子1(TRAF1)

pBlueScript SK(+)干擾α2b抗體Human RBM28 腫瘤壞死因子受體超家族成員18(TNFRSF18)

馬賽菌屬誘導協同激分子配體CD275抗體Human RBM4 腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)

狹霉鏈霉菌雞傳染性法氏囊病病抗體Human RBM42 腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)

冷溫木拉克酵母白介-17抗體Human RBM46 腫瘤壞死因子超家族15(TL1A/TNFSF15)

松口蘑5'肌磷脫氫2抗體Human RBM41 腫瘤壞死因子γ(TNFγ)

大豆慢生根瘤菌即刻早期應答基因5樣蛋白抗體Human RASGRP3(Ras guanyl-releasing protein 3) 腫瘤壞死因子β(TNF-β)

腸球菌屬整合αV抗體Human RBM14 腫瘤壞死因子β(TNFβ)

泡盛曲霉白介-19抗體Human RBM15 腫瘤壞死因子α轉化(TACE)

鼠李糖乳桿菌Lactobacillus│rhamnosus GG 質量規格:>99.0%(GC),標準物質升麻-3-O-β-D-吡喃木糖

ATCC10844=LMG2210資源名稱: 邊緣假單胞菌邊緣致病變種 質量規格:>99.0%(GC),標準物質仙鶴草B

氏假單胞菌Pseudomonas│migulae 質量規格:>99.0%(GC),標準物質馬錢
MEK抑制劑(PD98059)植物乳桿 2-羥基-6-白介28A

光孢黃叢枝珊瑚 2,4,5-三溴甲苯巨噬炎性蛋白1γ

蘋果鏈格孢 抗甲狀腺過氧化物抗體

Pseudomonas coleopterorum 2,5-二甲氧基芐N-甲基-D-天冬受體

蘇云金芽胞桿印第安那亞種 2-基-5-氟吡啶跨膜蛋白119

中國臺灣根霉 對乙DNA去甲基化轉移

葡萄座腔 3--2-β葡萄糖

干草鞘氨單胞 4-硝基愈創木組蛋白去甲基化轉移

Marinobacter excellens 丁酰乙乙酯過氧化物體增殖物激活受體δ

陰溝腸桿溶解亞種 3-氨基-2,2-二甲基酰Krueppel樣因子6

淡紫擬青霉 2'-乙基-6'-甲基-2-乙酰苯胰島受體β

葉片微桿 6-氟靛紅CD86分子

黑靈芝 2,3,4,6-四-O-基硅基-D-葡萄糖內酯成纖維生長因子7

釀酒酵母 四化五烯Apelin

穿孔艾美耳球蟲 聚六胍鹽鹽蛋白激B2

 


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