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SNR土壤硝酸還原酶可見分光光度法

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-12 13:28:10瀏覽次數:183次

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貨號 FS-01S63713
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產品名稱:SNR土壤硝酸還原酶可見分光光度法

規格:50管/24樣

檢測方法:可見分光光度法

貨號:FS-01S63713
商品介紹:

測定意義

S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,是土壤硝態氮還原的關鍵酶。研究S-NR的活性對合理施肥,降低氮素的損失具有重要意義。

測定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;產生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法測定。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153604.png

粗酶液提取:

1、細胞或組織樣品的制備:

培養細胞:先收集細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

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SNR土壤硝酸還原酶可見分光光度法乙二  99.4%鈉 分析標準品PLGF (Placenta growth factor fragment)(human)  人胎盤生長因子(多肽抗原)

三乙二二甲 99%鈉 99%PP-1  蛋白磷酯-1(抗原)

四乙二二甲 99%鈉 用于昆蟲培養, ≥99.0%BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)  骨成型蛋白受體1A抗原

四乙二二甲 standard for GC ,≥99.5% (GC) 對醌 97%PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor)  D型-過氧化活化增生受體(多肽)

四乙二二甲 matrix substance for MALDI-MS, ≥99.5% (GC)亞磺鈉 98%PP-2A (protein phosphatase 2A)  蛋白質磷-2A(抗原)

三乙二乙 95%對甲亞磺鈉 98%,無水物BOb-1(B-cell oct-binding protein 1)  B特異性轉錄因子抗原

間二 99%對甲亞磺鈉 98%,水合物PP-2B alpha 1   蛋白磷酯-2B 催化亞單位(抗原)

 氧化鋁  99.998% metals basis ,5~6μm,粉末三氟磺 98%PR (Progestogerone receptor)  孕受體(抗原)

 


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