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Aurora B抑制劑(Hesperadin)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 15:05:33瀏覽次數:159次

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貨號 FS-X10850
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培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱:Aurora B抑制劑(Hesperadin)

英文名稱:Hesperadin

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10850

產品介紹:

Hesperadin是ATP競爭性Aurora B抑制劑,IC50為250nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:422513-13-1

純度:99.67%

分子量:516.65

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

產氮假單胞菌小鼠絨毛膜促性腺激βAnti-PLK3 Antibody人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)

葉點霉屬人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子Anti-PLXDC1 Antibody人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)

楊奇青霉人色上皮衍生因子Anti-PMCH Antibody人α橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)

產氣莢膜梭菌 C型小鼠性激結合球蛋白Anti-PLXNC1 Antibody人α橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)

Chryseomicrobium imtechense人白介23Anti-PMS2CL Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)

樹舌2-3小鼠脫氫表雄S7Anti-PNKP Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)

金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)人克拉拉蛋白Anti-PMEPA1 Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)

pSH-EFIRES-B-AtAFB2-mCherry大鼠心肌營養1Anti-PNCK Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)

成晶節桿菌大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgAAnti-PMEPA1 Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)

釀酒酵母小鼠脫氫表雄Anti-PNN Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)

蛛網菌人低氧誘導因子1αAnti-PNPLA6 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)

火木層孔菌人黑色抗體Anti-PNPLA8 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)

豬丹絲菌小鼠高遷移率族蛋白B1Anti-PNPLA8 Antibody人血管抑/血管穩定蛋白(ANG)

泡盛曲霉大鼠脂蛋白αAnti-PODXL2 Antibody人血管抑/血管穩定蛋白(ANG)

金黃弗拉特氏菌人轉鐵蛋白受體Anti-POFUT1 Antibody人心型脂肪結合蛋白(h-FABP)

圍小叢殼小鼠內皮脂肪Anti-POFUT2 Antibody人心型脂肪結合蛋白(h-FABP)

跨膜蛋白4超家族成員3抗體番茄葉點菌人增生性瘢痕成纖維細胞

宮頸癌原癌基因8抗體貝氏葡萄座腔菌梨?;腿撕肀砥影┘毎?/span>

腫瘤壞死因子α誘導蛋白8抗體新月彎孢霉小鼠結節性硬化癥細胞

跨膜蛋白161A抗體柿苗擬莖點霉人膽管細胞型肝癌細胞
Aurora B抑制劑(Hesperadin)腐皮鐮孢 亞硫鈉瓊脂球蛋白輕鏈lambda

枯草芽孢桿 龍膽紫血液瓊脂基礎抑制性蛋白

油鑒別試劑  硫十二烷基鈉瓊脂內

球毛殼 PNB(對甲)內皮1

核黃氧化德沃斯氏 -6-羧內源性糖皮質

分枝節桿 WL營養瓊脂檸檬合

枯草芽孢桿 改良沙氏瓊脂培養基檸檬合

有柄樹舌靈芝(白芝)(可訂購) 沙氏BHI瓊脂凝集

黑木耳 -5-羧凝血原

地花 2-氨基-4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三皮質

露濕擬漆斑 1,2-雙(二苯基膦)乙烷皮質結合球蛋白

嗜糖土地芽孢桿 3-氨基-5-巰基-1,2,4-三氮唑皮質酮;腎上腺酮

密叢毛霉 改良亞硫鹽瓊脂皮質抑

醬油曲霉 UBA培養基葡萄糖

果生核盤 NBB培養基葡萄糖-6-磷脫氫
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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