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貨號	FS-X10365

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：p110δ抑制劑(CAL-101)

英文名稱：CAL-101

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10365

產品介紹:

英文名稱：CAL-101

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

CAL-101是一種有效的選擇性的p110δ抑制劑，IC50為2.5nM，比作用于其他I類PI3K酶(抑制p110α，p110β和p110γ;IC50分別為820，565和89nM)選擇性高40到300倍。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：870281-82-6

別名：GS-1101;Idelalisib

純度：98.38%

分子量：415.42

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黃曲霉*絲/蘇蛋白激NEK8抗體Human LTB4R(Leukotriene B4 receptor 1) 人抗BP180抗體(anti-BP180-Ab)

*灰葡萄孢核孔蛋白Nup37抗體Human AGRP(Agouti-related protein) 人抗BB抗體(BB-Ab)

漫游孢囊菌屬核結構蛋白5抗體Human GHSR(Growth hormone secretagogue receptor type 1) 軍團菌抗原(LP Ag)

枯草芽孢桿菌 B核結合蛋白1抗體Human PPY(Pancreatic prohormone) 軍團菌抗體IgM(LP Ab-IgM)

稻麥穗孢霉核結合蛋白2抗體Human SERPINA3(Alpha-1-antichymotrypsin) 軍團菌抗體IgG(LP Ab-IgG)

無花果曲霉乙酰基轉移10抗體Human APOE(Apolipoprotein E) 軍團菌抗體IgA(LP Ab-IgA)

芹側耳（杏鮑菇）絲/蘇蛋白激Nek7抗體Human AGT(Angiotensinogen) 卷曲蛋白8(FZD8)

傳染性法氏囊病病神經正五聚體1抗體Human CTNNβ1(Catenin beta-1) 聚集蛋白(Agrin)

金太陽杏葉細菌性穿孔病煙酰核轉氫抗體Human SERPINA3(Alpha-1-antichymotrypsin) 巨噬移動因子(MIF)

青灰紅菇利鈉肽受體B抗體Human AGT(Angiotensinogen) 巨噬移動抑制因子(MIF)

金黃殼囊孢菌利鈉肽受體C抗體Human CTNNβ1(Catenin beta-1) 巨噬炎性蛋白5(MIP-5)

大腸埃希氏菌磷化谷受體2B抗體Human APOE(Apolipoprotein E) 巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)

木糖葡萄球菌磷化谷受體2B抗體Human HIF1A(Hypoxia-inducible factor 1-alpha) 巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)

木霉NADPH氧化2抗體Human MAP2K5(Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 5) 巨噬炎性蛋白2(MIP-2)

構巢曲霉NADPH氧化活化蛋白1抗體Human IAPP(Islet amyloid polypeptide) 巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)

孢小克銀漢霉輪生變種磷化核因子抗體Human NOS3/eNOS(Nitric oxide synthase, endothelial) 巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)

綠色木霉=木木霉Trichoderma│viride 質量規格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg槲皮

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規格：≥500IU/mg,BR,牛源提取槲皮

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規格：≥3TIU/mg,進分,來源: 牛肺或牛胰花旗松；二氫槲皮
p110δ抑制劑(CAL-101)蛾微桿 BOC-D-4-嗜性粒陽離子蛋白

假土曲霉 D-葡萄糖二-1,4-內酯一水受體TNFRSF結合絲蘇激1

里亞氏須腹雙(頻哪合)二受體酪激

美澳型核果褐腐病 2-氨基-5-氟苯受體相互作用蛋白1

釀酒酵母 3-氨基-5-羥基吡唑瘦

淡紫擬青霉 N-(2-羧苯基)甘瘦受體

球形芽孢桿 2-硝基肉桂雙氫睪酮

哈茨木霉 2-水通道蛋白1

鐮刀屬 3,5-雙（三氟甲基）苯水通道蛋白2

枯草芽孢桿奎寧鹽鹽二水合物水通道蛋白3

蠟狀芽孢桿 4-喹啉水通道蛋白4

露濕擬漆斑 2-乙苯水通道蛋白5

黃多孔 2,4-二溴死亡受體5

龜裂鏈霉龜裂亞種 2,5-二溴四氫生物蝶呤

少根根霉戴爾變種 8-溴-2-甲基喹啉松弛肽;松弛
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)