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貨號	FS-X10853

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：ROCK抑制劑(Thiazovivin)

英文名稱：Thiazovivin

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10853

產品介紹:

Thiazovivin(Tzv)是新型的ROCK抑制劑，IC50為0.5μM，能促進hESC的存活。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1226056-71-8

純度：99.32%

分子量：311.36

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

釀酒酵母小鼠干擾誘導蛋白Anti-POTEA Antibody人C反應蛋白(CRP)

淺玫瑰鏈霉菌大鼠分泌型免疫球蛋白AAnti-POTEB Antibody人C反應蛋白(CRP)

干草鞘單胞菌人胃癌標志物Anti-POTEG Antibody人固(ALD)

金黑小單孢菌小鼠上皮中性粒活化肽78Anti-POU2F1 Antibody人固(ALD)

大鼠血紅氧合2Anti-POTEH Antibody人肌紅蛋白(MYO/MB)

曲霉小鼠氧化低密度脂蛋白抗體Anti-PPARD Antibody人肌紅蛋白(MYO/MB)

*紅城紅球菌人鱗狀上皮癌抗原2Anti-PPARA Antibody人心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

產二鏈霉菌大鼠骨膠原交聯Anti-PPFIBP1 Antibody人心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

鏈格孢蘋果專化型小鼠抗平滑肌抗體Anti-PPHLN1 Antibody人血管生成受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激1(Tie1)

玉大斑病菌大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽Anti-PPHLN1 Antibody人血管生成受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激1(Tie1)

尖孢鐮孢人胰腺癌標志物CA242Anti-PPIF Antibody人血管生成2(ANG-2)

人胃腸癌標志物CA199Anti-PPM1K Antibody人血管生成2(ANG-2)

黑曲霉小鼠胚胎干系MESPU30Anti-PPM1L Antibody人血管生成1(ANG-1)

白僵菌大鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉Anti-PPM1L Antibody人血管生成1(ANG-1)

擬柱形德克斯酵母大鼠吡啶交聯物Anti-PPM1K Antibody人血管生長(ANG)

死海鹽盒菌小鼠核因子κB亞基p65親和肽Anti-PPP1R11 Antibody人血管生長(ANG)

轉錄因子DP3抗體相關抗原661色二孢人結腸癌氟耐藥株

早期未分化視網膜及晶狀體蛋白EURL抗體長根小奧德蘑鱗柄變種人結腸癌耐氟細胞株

睪丸特異激底物蛋白抗體粗柄側耳(俗名：北風菌)鼠多巴胺能神經元細胞

MED17抗體青霉卵巢透明細胞癌
ROCK抑制劑(Thiazovivin)海水球艾格瓊脂瘟病IgA抗體

孢籃狀 TM培養基瘟病IgG抗體

白黃阮繼生氏 DL-泛瘟病IgM抗體

彎孢 2-環己酮甲乙酯瘟抗體

異常威克漢姆酵母假單胞分離肉湯間粘附分子1

糙卷霉肌測定培養基纖連蛋白

類食品乳桿性肉湯性結合球蛋白

魯毛霉煙測定培養基雄烯二酮

淺黃曲霉維生B12測定用培養基雄烯酮

香菇測定培養基血管緊張1-7

豇豆慢生根瘤泛測定培養基血管緊張??

薛瓦酵母游離生物測定培養基血管內皮生長因子

大腸埃希 2-血管內皮粘附分子1

卵孢木霉二環己基化膦血管生成1

紅緣層孔氣單胞培養基基礎血管生成2
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)