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貨號	FS-X10916

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：USP7/USP47抑制劑(USP7/USP47 inhibitor)

英文名稱：USP7/USP47 inhibitor

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10916

產品介紹:

USP7/USP47inhibitor是USP7/USP47的抑制劑，IC50分別為0.42uM和1.0uM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1247825-37-1

純度：98.17%

分子量：484.4

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

類干酪乳桿菌人葡萄糖轉運蛋白3Anti-Wnt1 Antibody小鼠17羥皮質類固(17-OHCS)

新疆黃桿菌人視黃結合蛋白Anti-WEE2 Antibody小鼠白介1α(IL-1α)

麥根腐平臍蠕孢人8羥基脫氧鳥Anti-WTAP Antibody小鼠白介1α(IL-1α)

綠僵菌人羥賴Anti-WRNIP1 Antibody小鼠白介2(IL-2)

擬青霉屬人GTP活化蛋白Anti-XPA Antibody小鼠白介2(IL-2)

副豬嗜血桿菌人載脂蛋白HAnti-XPA Antibody小鼠白介4(IL-4)

釀酒酵母人糖磷脂酰肌Anti-XPO4 Antibody小鼠白介4(IL-4)

變灰尾孢菌人美洲商陸Anti-XRCC2 Antibody小鼠白介6(IL-6)

雅氏艾美耳球蟲人脂多糖/內Anti-XRCC6 Antibody小鼠白介6(IL-6)

彎曲芽胞桿菌人preptinAnti-XRCC6 Antibody小鼠白介9(IL-9)

球孢白僵菌人過氧化物體增殖物激活受體αAnti-YARS Antibody小鼠白介9(IL-9)

大腸埃希菌人載脂蛋白EAnti-XRN2 Antibody小鼠苗條受體(LR/Ob-R)

冬克青霉人成骨生長肽Anti-YEATS2 Antibody小鼠苗條受體(LR/Ob-R)

Sphingomonas oligoaromativorans人破骨分化因子Anti-YBOX2 Antibody小鼠瘦(LEP)

枯草芽孢桿菌人羥基膠原吡啶交聯Anti-YOD1 Antibody小鼠瘦(LEP)

黑木耳人脫氧膠原吡啶交聯Anti-YTHDF1 Antibody小鼠白血病抑制因子(LIF)

癌基因VAV2抗體皺褶革菌中國倉鼠肺細胞

囊泡相關膜蛋白相關的蛋白B黃斑紅菇人類成纖維細胞系

絲/蘇特定蛋白磷抗體褐黃鱗銹耳大鼠肝細胞

血管生長因子VG5Q抗體鉛色短孢牛肝菌小鼠X小鼠
USP7/USP47抑制劑(USP7/USP47 inhibitor)大腸埃希氏銀、砷、鉍、鉻、銅、鐵、鎂、錳、鎳、鉛、鈀、銻、硅/Ag, As, Bi, Cr, Cu, Fe,過氧化物體增殖物激活受體

熒光假單胞鋁、砷、鉍、鎘、銅、鐵、鉛、鈀、銻、硒、錫、碲、鋅/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe,核轉錄因子

變幻青霉鋁、砷、鉍、鎘、銅、鐵、鉛、鈀、銻、硒、錫、碲、鋅/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe,8羥基脫氧鳥

Hypoxylon perforatum 銀、鋁、、鋇、鈣、、鋰、鎂、鈉、鎳、銻、硒、錫/Ag, Al, B, Ba, Ca, K, Li可溶性環氧化物水解

根霉砷、鋇、鈷、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉛、錸、銻、硒、錫、碲/As, Ba, Co, Cr, Cu, Fe皮質

委內瑞拉鏈霉菊糖變、鋇、鎘、鈷、銅、鐵、錳、鉬、鎳、鉛、銻、鈦、釩、鋅/B, Ba, Cd, Co, Cu, Fe,葡萄糖

裂褶鋁、鈣、鉻、銅、鐵、鎂、錳、鉬、鈉、鎳、鉛、錫、釩、鋅/Al, Ca, Cr, Cu, Fe, Mg封閉蛋白

德爾布有孢圓酵母鋁、鈣、鎘、鉻、銅、鐵、、鎂、錳、鈉、鎳、鉛、釩、鋅/Al, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe補體蛋白3

糖化酵母鋁、、鈣、鉻、銅、鐵、鎂、錳、鎳、磷、鉛、硒、硅、鋅/Al, B, Ca, Cr, Cu, Fe,γ-分泌

羅倫隱球酵母鋁、、鋇、鈣、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鈉、磷、鈦/Al, B, Ba, Ca, Cr, Cu,髓過氧化物

氏解硫芽孢桿鋁、砷、鉍、鎘、銅、鐵、鎂、錳、磷、鉛、銻、硅、錫、鋅/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe白介4

蟹味菇鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm,緊密連接蛋白1

黃海黃色彎曲鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm,粘蛋白2

三方氏酵母砷、鋇、鈷、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉛、錸、銻、硒、錫、碲、鋅/As, Ba, Co, Cr, Cu,緊密連接蛋白

蠟樣芽胞桿 (蠟狀芽胞桿) 砷、鋇、鈹、鈷、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉑、銻、硒、錫，碲、鋅/As, Ba, Be, Co, Cr,β-防御
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)