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貨號 | FS-X10251 |
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產品介紹:
英文名稱:Z-VAD-FMK 產品規格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg Z-VAD-FMK是一種可滲透細胞的廣譜caspase抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:187389-52-2 別名:Z-VAD(OMe)-FMK;Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK 純度:98.0% 分子量:467.49 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
英文名稱:Z-VAD-FMK
產品規格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
貨號:FS-X10251
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
血紅擬革蓋菌肝生長因子激活物抑制劑抗體Human SERPINI2 倉鼠甲狀腺結合球蛋白(TBG)免疫試劑盒
高溫金針菇HA tag標簽單克抗體Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) 倉鼠低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒
紡織品 纖維含量(棉與莫代爾纖維)血紅抗體Human SETD1B 倉鼠基質金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫試劑盒
黃曲霉戊型肝炎病抗體Human SERPINB8 倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)免疫試劑盒
釀酒酵母神經調節蛋白1抗體Human SERPINB9 倉鼠核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌神經膠質生長因子/神經調節蛋白β抗體Human SERPIND1(Serpin family D member 1) 倉鼠過氧化物3(GPX3)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌組三聚體核結合蛋白1抗體Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) 倉鼠促卵泡(FSH)免疫試劑盒
發酵乳桿菌(現貨)組蛋白去乙酰化3抗體Human SERPINI2 倉鼠二(MDA)免疫試劑盒
單核增生利斯特菌高度發散同源異型盒蛋白抗體Human SERINC1 倉鼠白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
宇佐美曲霉腺病六鄰體蛋白抗體Human SERINC2 倉鼠白介6(IL-6)免疫試劑盒
龜裂鏈霉菌高密度脂蛋白結合蛋白抗體Human SERF2 倉鼠白介3(IL-3)免疫試劑盒
多源中間根瘤菌轉錄因子HNF-3α抗體Human SENP1 倉鼠白介2(IL-2)免疫試劑盒
釀酒酵母熱休克蛋白β7抗體Human GAL(Galanin peptides) 倉鼠白介1β(IL-1β)免疫試劑盒
微球菌E3連接抑制受體2抗體Human SENP3 倉鼠白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
芽孢桿菌透明質及粘蛋白3抗體Human SENP5 倉鼠γ干擾(IFNG)免疫試劑盒
臭曲霉22號染色體開放閱讀框28抗體Human CFP(Properdin) 倉鼠N端前腦鈉(NT-proBNP)免疫試劑盒
膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質量規格:0.99異鼠李-3-O-新橙皮
大腸埃希菌Escherichia│coli 質量規格:分析標準品,98.6%亥茅
: 43948資源名稱: 分枝桿菌 質量規格:分析標準品5-羥色
caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)Sphingobacterium anhuiense 正基乙烯基M2型酮激
藤黃微球 4-氟-2-硝基溴芐連蛋白
雞白痢沙門氏 2,3-二氫苯并呋喃-5-甲二氧化
土曲霉 2,2,2-三乙基酯谷轉氨
香菇 丁氧羰基-D-二氨基二羥基巰基轉移
根霉屬 3-乙氧基乙酯過氧化物
魚肉 霉、甲砜霉、氟甲砜霉 4-吡唑乙脫氫家族1-A3
環狀芽孢桿 4-正庚基溴苯雌三
大腸埃希氏 4-溴-2-氟芐溴氨基乙二半合
綠色綠芽 內向-3-氨基-9-甲基-9-氮雜雙環[3,3,1]壬烷上皮性鈣黏附蛋白
紅蠟盤 1-溴-2-氟乙烷樁蛋白
托拉斯假單胞 3-鄰苯二5-羥色受體4
堆形艾美耳球蟲 2-酰孕酮受體
印度芽孢桿 3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡鹽鹽抗II型膠原自身抗體
尖孢隔指孢 乙炔二羧二乙酯血管緊張轉化
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