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貨號	FS-X11008

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：MEK變構抑制劑(TAK-733)

英文名稱：TAK-733

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X11008

產品介紹:

TAK-733是MEK變構抑制劑，對MEK1的IC50為3.2nM，而對Abl1，AKT3，c-RAF，CamK1，CDK2和c-Met則無活性。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1035555-63-5

純度：99.74%

分子量：504.23

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

豇豆慢生根瘤菌Pseudomonas aeruginosa大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)

花楸盤多毛孢Pseudomonas aeruginosa大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)

靈芝(紅芝，赤芝)Pseudomonas aeruginosa大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)

氏針層孔菌Pseudomonas aeruginosa大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)

釀酒酵母Pseudomonas aeruginosa大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)

腸沙門氏菌腸亞種邁阿密血清型Pseudomonas aeruginosa大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)

產紅青霉Pseudomonas aeruginosa大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)

基簡馬杜拉放線菌Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)

尿腸球菌Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)

褐紅小孔菌Pseudomonas aeruginosa大鼠游離脂肪(FFA)

蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種Pseudomonas aeruginosa大鼠游離脂肪(FFA)

平菇Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)

托姆青霉Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)

豌豆根瘤菌Pseudomonas aeruginosa大鼠骨粘連蛋白(ON)

黑曲霉Pseudomonas aeruginosa大鼠骨粘連蛋白(ON)

玉乳桿菌Pseudomonas aeruginosa大鼠葉(FA)

P2Y1受體抗體/受體抗體極細鏈格孢人誘導型多能干細胞（iPS細胞）DYR00（干細胞庫保藏）

腺環化激活肽-38抗體裂擬迷孔菌大鼠骨髓MSC間充質干細胞（干細胞庫保藏）

蛋白活化受體4抗體外皮毛霉小鼠胚胎肌母細胞（2014年新引進）（未分化，可誘導分化形成肌纖維）（干細胞庫保藏）

p21激活激4抗體星形擬盤多毛孢人類胚胎干細胞H1（干細胞庫保藏）
MEK變構抑制劑(TAK-733)巨大芽孢桿 β-巰基乙鹽鹽

蜂蜜曲霉喹啉黃

Penicillium 8-氮鳥

海泥黃桿草甘二磷

蠟狀芽孢桿異丹C

鏈球(不定種) 調環鈣

釀酒酵母丹A甲酯

枯草芽孢桿 3-羥基-5-甲基異惡唑

型副傷門氏地膚子皂Iia

云南擲孢酵母噻苯咪唑

釀酒酵母地膚子皂II

根癌農桿GV31 D-(+)-蘋果

桔青霉竹節參皂V甲酯

豬瘟病甘油三酯

樹舌靈芝白花前胡香豆精III
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)