細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號(hào)：FS-01X9866

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

豬內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬血管生成2(ANG-2)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬血管生成受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪激2(Tie-2)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬血管生成1(ANG-1)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Angiopoietin 1,ANG-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬乙酰受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Heat Shock Protein 90,HSP-90 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Heat Shock Protein 40,HSP-40 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Heat Shock Protein 20,HSP-20 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine C-reactive protein,CRP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA試劑盒英文名稱：swine major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬可溶性P選擇(sP-Selectin)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine soluble P-selectin,sP-Selectin ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬白介17(IL-17)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine interleukin 17,IL-17 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine myelin basic protein,MBP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬生長(zhǎng)釋放多(GHRP)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬α干擾(IFN-α)ELISA試劑盒 英文名稱：Porcine Interferon α,IFN-α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

豬磷化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞ALOXE3  表皮型脂氧合3抗體（魚鱗病相關(guān)蛋白）規(guī)格: 0.2ml

ALPK3  α蛋白激3抗體（心肌）規(guī)格: 0.2ml

CEND1  細(xì)胞周期通道和神經(jīng)細(xì)胞分化蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

DHRS9  短鏈脫氫/還原家族9抗體規(guī)格: 0.2ml

DLL3  Notch信號(hào)通路Delta樣配體3抗體規(guī)格: 0.2ml

EME1  減數(shù)分裂內(nèi)切EME1抗體規(guī)格: 0.2ml

FAM3C/ILEI  上皮分泌型FAM3C蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

FSTL5  卵泡抑相關(guān)蛋白5抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。