細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：真皮毛乳頭細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9867

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

豬乙酰(ACh)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine acetylcholine,ACH ELISA Kit規格:96T/48T

豬主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/SLAⅢ)ELISA試劑盒英文名稱：swine major histocompatibility complexⅢ,MHCⅢ/SLAⅢ ELISA Kit規格:96T/48T

豬肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Pulmonary surfatcant-associated protein A,SP-A ELISA Kit規格:96T/48T

豬雌二受體(ER)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Estradiol receptor,ER ELISA Kit規格:96T/48T

豬補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Complement 3,C3 ELISA Kit規格:96T/48T

豬骨鈣/骨蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA Kit規格:96T/48T

豬腎上腺(EPI)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit規格:96T/48T

豬脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit規格:96T/48T

豬促甲狀腺釋放(TRH)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine thyrotropin-releasing hormone,TRH ELISA Kit規格:96T/48T

豬抗受體(ATR)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine anti-thrombin receptor,ATR ELISA Kit規格:96T/48T

豬組(HIS)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Histamine,HIS ELISA Kit規格:96T/48T

豬雌二(E2)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine Estradiol,E2 ELISA Kit規格:96T/48T

豬轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine transforming growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit規格:96T/48T

豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit規格:96T/48T

豬脂聯(ADP)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine adiponectin,ADP ELISA Kit規格:96T/48T

豬載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit規格:96T/48T

豬載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit規格:96T/48T

豬胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒英文名稱：Porcine insulin-like growth factors binding protein 3,IGFBP-3 ELISA Kit規格:96T/48T
真皮毛乳頭細胞Flightless 1  凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體規格: 0.2ml

GPSM1  G蛋白信號調節蛋白1抗體規格: 0.2ml

Intra Acrosomal Protein/SP10  頂端體蛋白10抗體規格: 0.2ml

KLHL8  Kelch樣蛋白8抗體規格: 0.2ml

Iroquois homeobox protein 3  Irx3蛋白抗體規格: 0.2ml

LHX6  轉錄因子LHX6抗體規格: 0.2ml

MRP8+MRP14  多藥耐藥相關蛋白8/9/14抗體規格: 0.2ml

NEU4  神經4抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。