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SCAT土壤過氧化氫酶紫外分光光度法

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廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-12 13:27:24瀏覽次數:252次

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貨號 FS-01S63711
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產品名稱:SCAT土壤過氧化氫酶紫外分光光度法

規格:50管/24樣

檢測方法:紫外分光光度法

貨號:FS-01S63711

商品介紹:

測定意義

S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類,在H2O2清除系統中具有重要作用。

測定原理:

H2O2在240nm下有特征吸收峰,通過測定與土壤反應后溶液在此波長下吸光度的變化,即可反應S-CAT活性的高低。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

粗酶液提取:

1、細胞或組織樣品的制備:

培養細胞:先收集細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
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