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C4H肉桂酸4羥化酶檢測試劑盒微量法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-12 15:43:50瀏覽次數:280次

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貨號 FS-01S63835
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產品名稱:C4H肉桂酸4羥化酶檢測試劑盒微量法

規格:100管/96樣

檢測方法:微量法

貨號:FS-01S63835

商品介紹:

測定意義

C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,多存在于高等植物、酵母、菌類中,該酶催化肉桂酸羥化作用產生4-香豆鹽,是苯丙烷途徑中繼L-苯氨酸解氨酶之后的第二個關鍵酶。

測定原理:

C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映C4H活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

粗酶液提取:

1、細胞或組織樣品的制備:

培養細胞:先收集細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
EB病清道夫受體BEBV

磷化信號轉導和轉錄激活因子3肽BPhospho-Stat3

HLAⅡ類組織相容性抗原,DPα1鏈抗菌肽HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain

主要組織相容性復合體Ⅱ類顆粒溶major histocompatibility complexⅡ

蘋果脫氫2富組蛋白Malate Dehydrogenase2

前列腺E合2球蛋白樣轉錄體受體Prostaglandin E Synthase 2

γ谷酰轉肽絲狀血球凝集gamma glutamyl transpeptidase

白細胞介6絨毛蛋白/埃茲蛋白Interleukin 6

透明質嗜環蛋白/親環AHyaluronic acid

Ⅳ型膠原肌養蛋白Collagen TypeⅣ

磷烯式丙酮羧激膠原凝集phosphoenolpyruvate carboxykinase

果糖-1,6-二磷伴侶蛋白10Fructose-1,6-Bisphosphatase

葡萄糖-6-磷纖調蛋白Glucose-6-phosphatase, catalytic

糖原合成鈣網蛋白Glycogen synthase

趨化因子配體3網膜ELISA Kit for ChemokineLigand 3
C4H肉桂酸4羥化酶檢測試劑盒微量法乙鈉 98%穗花牡荊甙 分析標準品,≥98% Anti-LY-96/MD-2  MD-2蛋白抗體

硫代甜菜 12 98%桃葉珊瑚苷 分析標準品,≥98%Anti-Lysozyme  溶菌抗體

十二烷基硫鈉 97%,電泳白果內酯 分析標準品,≥99%Anti-Lyn  膜相關蛋白酪激Lyn抗體

十二烷基硫鈉 99.0%,超純級巴卡丁 III  分析標準品,≥99%Anti-Phospho-Lyn (Tyr507)  膜相關蛋白酪激Lyn抗體

硫代甜菜 8 98%松果菊苷 分析標準品,≥95% Anti-Phospho-Lyn (Tyr396)  磷化膜相關蛋白酪激Lyn抗體

硫代甜菜10 98%雪上一枝蒿甲 分析標準品,≥97%Anti-Phospho-Lyn (Tyr497)  磷化膜相關蛋白酪激Lyn抗體

二甲藍FF 80%雪上一枝蒿乙 分析標準品,≥98%Anti-LYVE-1  管內皮透明質受體抗體

10.0μL微量進樣器 尖頭菊苣 分析標準品,≥98%Anti-M2-PK/PKM2  酮激-M2抗體

 


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