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Rapamycin 自噬誘導劑,mTOR抑制劑

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-18 10:35:16瀏覽次數:198次

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貨號 FS-X10254
Rapamycin 自噬誘導劑,mTOR抑制劑正在熱銷的產品:PFK2/PFKFB3 /FITC 熒光標記6果糖激2抗體IgG鎢 99.99% metals basis
Phospho-PFK2 (Ser466) /FITC 熒光標記化6果糖激2抗體IgG1,1,2-三烷 standard for GC, ≥99.8% (GC)
KLF2/FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠腸道內富含的Kr

中文名稱:Rapamycin 自噬誘導劑,mTOR抑制劑

英文名稱:Rapamycin(Sirolimus)

產品規格:1mg

貨號:FS-X10254

產品介紹:

英文名稱:Rapamycin(Sirolimus)

產品規格:1mg

:53123-88-9

分子量:914.18

儲存:-20℃,有效期36個月

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

孤島鹽單胞菌二甲基化組蛋白H3K4抗體Human SCN4B 類人猿

海南小短桿菌二甲基化組蛋白H3K9抗體Human SDCCAG10 類人猿免疫球蛋白G4(IgG4)免疫試劑盒

梾木生殼針孢基化組蛋白H3抗體Human SEC23IP 類人猿巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒

植物乳桿菌植物亞種乙酰化組蛋白H3抗體Human VTCN1(V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1) 類人猿降鈣基因相關肽(CGRP)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌乙酰化組蛋白H3抗體Human SEC24C 類人猿降鈣(CT)免疫試劑盒

燼灰紅鏈霉菌果糖發酵亞種磷化肝核因子4α抗體Human SEC24A 類人猿黃體生成(LH)免疫試劑盒

賴芽胞桿菌屬高遷移率核小體結合蛋白1Human SEC31A 類人猿骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

根瘤菌磷化組蛋白H3抗體Human SDR39U1 蝌蚪

木蹄層孔菌組織相容性復合體α抗體Human SEC5/EXOC2 蝌蚪睪(T)免疫試劑盒

黑木耳肝生長因子激活抑制蛋白2抗體Human SEC61alpha 蝌蚪雌二(E2)免疫試劑盒

植物乳桿菌HOMER2抗體Human SDR42E1 蝌蚪γ基丁(GABA)免疫試劑盒

蟲類神食酵母瘤病調控因子1抗體(鋅指蛋白395)Human SDCCAG8 鯨

桔橙小單孢菌人類狀瘤病18 E6單克抗體Human SCN4B 鯨孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

白鵝膏菌(不可訂購)異質核糖核蛋白F抗體Human SDCCAG10 鯨狀腺原(T3)免疫試劑盒

沃氏富鹽菌異質核糖核蛋白K抗體Human SCNM1 鯨皮質(Cortisol)免疫試劑盒

相思根瘤菌異質核糖核蛋白L抗體Human SCNN1A 鯨甲狀腺(T4)免疫試劑盒

: N144資源名稱: 大腸埃希氏菌 質量規格:1.0 M in toluene常春藤皂元

黑曲霉Aspergillus│niger 質量規格:分析標準品D-松

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規格:分析標準品
Rapamycin 自噬誘導劑,mTOR抑制劑聚紅粉端孢霉 6-噠3-羧乙酯Flag標簽

紅色蠟蘑 甲基膦二甲酯腺病抗體

香港洛克氏 三溴鼠痘病抗體

白僵 N-甲基二環己基肺炎病抗體

長蠕孢 磷氟達拉濱呼腸孤病III型抗體

 對溴苯甲酯脈絡叢腦膜炎病IgG抗體

Aquimonas 4-甲基吡唑流行性出血熱病抗體

Microbacterium marinilacus D-(+)-蘋果二乙酯過氧化物

變異鏈霉 5-氨基-1,2,4-噻二唑完整的成纖維生長因子23

干草鞘氨單胞 5--2-苯甲成纖維生長因子23的C端裂解片段

蠟狀芽孢桿 2-溴-5-苯甲去乙酰化Sirtuin-6

枯草芽胞桿 雙(3-氨基-4-羥苯基)砜球蛋白G2b

產堿普羅威登斯 2-氨基-5-溴-3-芐氧基吡啶球蛋白G3

假單胞 7-氮雜-5-羧組織因子

鹽假單胞 2-(3-1H-吡唑基)吡啶抗抗體

 


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