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貨號	FS-X10856

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：NAMPT抑制劑(GMX1778)(CHS-828

英文名稱：GMX1778

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10856

產品介紹:

GMX1778(CHS-828)是NAMPT高效抑制劑，可抑制劑NAD_addition_的生化合成，IC50值小于25nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：200484-11-3

純度：99.65%

分子量：371.86

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

耐多抗諾卡氏菌大鼠P物質Anti-PRKAR1A Antibody人類似RIKEN cDNA 26307008 基因

長孢洛德酵母大鼠αL巖藻糖Anti-PRKAG2 Antibody人類似RIKEN cDNA 26307008 基因

卷枝毛霉卷枝變型小鼠γ干擾誘導蛋白16/p16Anti-PRKAR1B Antibody人類似RIKEN cDNA 209K09 基因

安大略假絲酵母人肺炎支原體抗體Anti-PRKAR2A Antibody人類似RIKEN cDNA 209K09 基因

泡盛曲霉人肺炎衣原體抗體Anti-PRKD1 Antibody人ras同源物基因家族成員b(RHOB)

阿爾通山堿線菌大鼠甲狀腺過氧化物Anti-PRKCZ Antibody人ras同源物基因家族成員b(RHOB)

膠孢小鼠基質衍生因子1aAnti-PRKCD Antibody人假定蛋白LOC677340

食吡啶紅球菌小鼠血管內皮生長因子Anti-PRKCSH Antibody人假定蛋白LOC677340

香菇大鼠胰島Anti-PRKDC Antibody人假定蛋白LOC433328

大腸埃希菌人肺耐藥蛋白Anti-PRKG1 Antibody人假定蛋白LOC433328

釀酒酵母人α1抗胰糜蛋白Anti-PRKG2 Antibody人髓樣分化因子初次應答基因88(MYD88)

黃傘大鼠抗IgE受體抗體Anti-PRKG2 Antibody人髓樣分化因子初次應答基因88(MYD88)

中孢短芽孢桿菌小鼠血漿α顆粒膜蛋白Anti-PRKX Antibody人干擾活化基因205(Ifi205)

普雷恩毛霉大鼠抗IVIgG抗體Anti-PRKN Antibody人干擾活化基因205(Ifi205)

芹側耳（杏鮑菇）人肺表面活性物質相關蛋白AAnti-PROKR1 Antibody人組織相容性2-K1-K 區(H2-K1)

哈氏弧菌小鼠髓過氧化物Anti-PRKY Antibody人組織相容性2-K1-K 區(H2-K1)

TBR1蛋白抗體硫色鐮刀菌KYSE180 人食管鱗癌細胞

感光細胞轉錄因子TULP3抗體枝狀枝孢KYSE140 人食管鱗癌細胞

TSK蛋白抗體擬土黃紅菇SNU119 人卵巢癌細胞

味覺受體蛋白家族2亞基5抗體茶銀耳A1847 人卵巢癌細胞
NAMPT抑制劑(GMX1778)(CHS-828產紅青霉 CHO培養基基礎轉化生長因子β

基簡馬杜拉放線 SCHAEDLER瓊脂轉化生長因子β1

尿腸球 Campy-Cefex瓊脂基礎轉鐵蛋白

褐紅小孔 2,5-二吡啶轉鐵蛋白受體

蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 Campy-Cefex添加劑總蛋白

平菇 Nα-甲酰基-DL-色總抗氧化能力

托姆青霉 L-1,4-二硫代蘇糖阻抑

豌豆根瘤 4-甲基組

黑曲霉 (S)-(-)-環氧烷組織因子

玉乳桿三(二基)膦腦磷脂

假單胞二環己烷并18-冠-6

黃肉座 2,2'-(2-丁炔-1,4-二基二氧)二乙(含約的異構體)心磷脂

樟疫霉苯基三乙基溴化鞘磷脂

解脂假絲酵母單硝異山梨酯偽狂犬病病GPI

香菇 2-氨基-5-內皮型一氧化氮合
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)