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貨號 | FS-X10723 |
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英文名稱:Calyculin A
產品規格:0.5mM*20μL|0.5mM*50μL|0.5mM*200μL
貨號:FS-X10723
產品介紹:
Calyculin A有效抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)的催化亞基,IC50值為0.5-1nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:101932-71-2 別名:(-)-Calyculin A 純度:98.0% 分子量:1009.17 儲存條件:-20℃避光,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
糞腸球菌N-鈣粘附分子抗原Anti-DBF4 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)
黑木耳E-鈣粘附分子抗原Anti-DAPK3 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)
枯草芽孢桿菌去氧腎上腺Anti-DCLK3 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)
玫瑰色鏈霉菌神經粘蛋白抗原Anti-DBI Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)
枯斑擬盤多毛孢2型神經纖維瘤抗原Anti-DCLK2 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)
孟氏假單胞菌活化T核因子1蛋白Anti-DCLRE1B Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)
膠紅酵母磷化核因子/磷化k基因結合核因子抗原Anti-DCLRE1C Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)
猜也蓬小單孢菌核因子50/κ基因結合核因子50抗原Anti-DCT Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)
木耳神經元3抗原Anti-DDB1 Antibody人胰島樣生長因子2(IGF-2)
絲核菌屬鼻咽癌相關基因6(多肽)Anti-DDIAS Antibody人胰島樣生長因子2(IGF-2)
虎皮香菇,漏斗香菇NIT2蛋白抗原Anti-DDB2 Antibody人胰島樣生長因子1(IGF-1)
煙曲霉神經激肽A抗原Anti-DCTN2 Antibody人胰島樣生長因子1(IGF-1)
粉紅孢囊游動放線菌NK受體2A/自然殺傷活化性受體2A抗原Anti-DDIAS Antibody人γ干擾(IFN-γ)
香菇*NK受體/自然殺傷活化性受體Anti-DDIT3 Antibody人γ干擾(IFN-γ)
北京鳥微菌腫瘤轉移抑制基因抗原Anti-DDX20 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
科氏梭菌腫瘤抑制基因抗原Anti-DDX24 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
P4501A2抗體紫紅曲霉小鼠白血病細胞
6磷果糖激2抗體紅曲霉人神經膠質細胞瘤細胞
蛋白激Cα抗體煙曲霉小鼠乳腺癌細胞
磷酯Cγ1抗體臭曲霉人肺腺癌細胞
PP2A催化亞基抑制劑(Calyculin A)Sinomonas 4-三氟甲神經膠質纖維性蛋白
慢生根瘤 對三氟鈣衛蛋白
黃青霉 4-氨基三氟甲苯S100鈣結合蛋白B
副球 4-三氟甲苯抗乙酰受體抗體
大腸埃希氏 1,9-二溴壬烷骨保護
香菇 1,8-二溴辛烷骨堿性磷
假單胞 3-三氟甲Dickkopf相關蛋白1
大毛霉 3-(三氟甲基)苯甲Dickkopf相關蛋白2
網孢麻孢 2--5-硝基吡啶骨鈣
橙蓋傘 2-溴-5-(三氟甲基)苯骨成型蛋白
中國油脂酵母 5-氟-2-層粘連蛋白
釀酒酵母 2--5-氟苯白介23
淡紫擬青霉 3-氟-4-白介27
葡萄座腔 4-氟-2-弓首蛔蟲病抗體
卵孢白僵 3,4-二甲基氟苯包蟲抗體
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