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貨號	FS-X10387

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Flt3抑制劑(Quizartinib)

英文名稱：Quizartinib

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

貨號：FS-X10387

產品介紹:

英文名稱：Quizartinib

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

Quizartinib是一種有效的選擇性的Flt3抑制劑，體外生化實驗中，Kd(FLT3親和力檢測實驗)為1.6±0.7nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：950769-58-1

別名：AC220

純度：99.46%

分子量：560.67

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

白乳菇核蛋白p8抗體Human CD56(Neural Cell Adhesion Molecule) 桿狀病IAP重復包含蛋白2/3(BIRC2/3)

柔嫩艾美耳球蟲神經內分泌特異性蛋白2抗體Human CD40L(Cluster of Differentiation 40 Ligand) 肝脂(HL)

蘇云金芽孢桿菌還原型輔Ⅱ氧化5/煙酰腺二核磷抗體Human CCL15(C-C motif chemokine 15) 肝臟型脂肪結合蛋白(L-FABP)

季也蒙假絲酵母核干因子抗體(鳥核結合蛋白3)Human CCL16(Chemokine C-C-Motif Ligand 16) 肝臟甘油三脂脂肪(HTGL)

滅酵母尼曼匹克C1前體蛋白抗體Human PRB4(Basic Salivary Proline Rich Protein 4) 肝型脂肪結合蛋白(L-FABP)

四脊裸胞殼去甲腎上腺轉運蛋白/神經遞質去甲腎上腺轉運體抗體Human CCL18(C-C motif chemokine 18) 肝生長因子激活物(HGFA)

鏈桿菌核孔復合體蛋白88抗體Human CCL17(C-C motif chemokine 17) 肝生長因子(HGF)

釀酒酵母核仁蛋白8抗體Human CCL23(C-C motif chemokine 23) 肝核因子1β(HNF-1B)

炭黑曲霉NCK銜接蛋白2抗體Human CCL27(C-C motif chemokine 27) 肝結合性表皮生長因子(HB-EGF)

蜜蜂類芽胞桿菌腎小球裂孔膜蛋白PDCN抗體Human CCL24(C-C motif chemokine 24) 肝結合EGF樣生長因子(HBEGF)

膜醭畢赤酵母豆蔻酰基轉移1抗體Human ALCAM(CD166 antigen) 肝輔因子Ⅱ(HCⅡ)

微球菌利鈉肽受體A抗體Human CCL4(C-C motif chemokine 4) 肝癌抗原(PHC)

橄欖色盤多毛孢神經調節蛋白3抗體Human CCL25(C-C motif chemokine 25) 肝X受體β(LXRβ)

腐皮鐮孢神經前體表達蛋白1抗體Human CCL7(C-C motif chemokine 7) 肝X受體α(LXRα)

大腸埃希氏菌絲/蘇蛋白激NEK1抗體Human CTSD(Cathepsin D) 甘油三酯(TG)

香菇N-乙酰轉移8樣蛋白抗體Human CTSS(Cathepsin S) 甘油-3-磷脫氫(GAPDH/G3PDH)

海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae 質量規格：>90%,分子生物學級

硫色曲霉Aspergillus│sulphureus 質量規格：>98%,BR

土曲霉Aspergillus│terreus 質量規格：>98%,BR
Flt3抑制劑(Quizartinib)鏈格孢 4,5,6,7-四氫噻吩并[3.2-c]吡啶組織激肽釋放

哈茨木霉 2--3-甲氧基苯甲組織型谷氨酰轉移

滑菇、光帽黃傘 2-喹喔啉甲酰組織型纖溶原激活劑

橙色綠屈擾 2-甲基-4-硝基氧化吡啶組織因子

猴頭 2--3-溴-5-硝基吡啶組織因子途徑抑制物

硬水黃桿 3-氨基噠胰島樣生長因子抗體

白色腥擲孢 (+/-)-β-羥基-中間α球蛋白抑制因子H3

副豬嗜血桿醋鋰載脂蛋白C4

水生哈薩克斯坦酵母 2-氨基苯乙酮鹽鹽纖維蛋白原β

土生類諾卡氏四乙鉛BELSA

頂生腐霉 3-巰基乙酯ELRIR

東方假單胞 4'--3'-乙酮白介6抗體

釀酒酵母基硅烷基乙炔鋰第八因子相關抗原

薄層 N-叔丁氧羰基-N'-(2-芐氧羰基)-L-賴磷化外信號調節激2

吐魯番考克氏 D-烯基甘C-Raf原癌基因絲蘇蛋白激
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)