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貨號 | FS-X10997 |
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培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:PAK小分子抑制劑(FRAX1036)
英文名稱:FRAX1036
產品規格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10997
產品介紹:
FRAX1036是新型ATP競爭性的PAK小分子抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1432908-05-8 純度:98.0% 分子量:518.05 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
普利茅斯Escherichia coli大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)
污黃小菇Escherichia coli大鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)
小白菇(疊生)Escherichia coli大鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)
焰耳Escherichia coli大鼠熱休克因子1(HSF1)
大豆慢生根瘤菌Escherichia coli大鼠熱休克因子1(HSF1)
大腸埃希氏菌Escherichia coli大鼠β羥丁(βOHB)
大腸埃希菌Escherichia coli大鼠β羥丁(βOHB)
白靈側耳Escherichia coli大鼠色P450(CYP450)
枯草芽孢桿菌Escherichia coli大鼠色P450(CYP450)
黃青霉Escherichia coli大鼠生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)
釀酒酵母Escherichia coli大鼠生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)
產朊假絲酵母Escherichia coli大鼠內臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)
產短桿菌Escherichia coli大鼠內臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)
黑曲霉Escherichia coli大鼠溴脫氧核(BrdU)
解淀粉芽孢桿菌Escherichia coli大鼠溴脫氧核(BrdU)
黑曲霉Escherichia coli大鼠轉化生長因子β2(TGFβ2)
非典型蛋白激C特定相互作用蛋白抗體黃薄芝小鼠SRSV轉化的3T3細胞
含patatin樣磷脂6抗體金黃硬皮馬勃小鼠腎集合管細胞(SV40轉化)
26S蛋白調節亞型抗體褐紅小孔菌人結腸癌轉基因細胞
軸周蛋白PRX抗體擬莖點霉屬人胚視網膜轉化細胞
PAK小分子抑制劑(FRAX1036)釀酒酵母 狼色酮
蜂房芽胞桿 四基化
嗜熱脂肪地球芽胞桿 人參皂Rs3
枯草芽孢桿 金堿
海洋嗜殺酵母 菊粉
黃桿 去甲血根堿
枯草芽孢桿 異櫻花
栗疫 2,5-二羥基苯甲
變棕溶桿 3,4'-O-二甲基鞣花
邊緣假單胞邊緣致病變種 海柯皂元
羊毛狀青霉 1-萘磷鈉鹽一水
微小桿 4,4'-O-二甲基鞣花
冰川薄層屬 對二甲氨基苯甲
1,8-十七碳二烯-4,6-二炔-3,-二
大腸埃希 人參環氧炔
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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