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產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
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適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9667 |
產品屬于:
產品名稱:小鼠骨肉瘤成骨細胞+LUC
產品英文:K7M2WT(K7M2-WT)-LUC
貨號:FS-01X9667
細胞培養條件:DMEM+10%FBS+1%P/S
生長狀態:貼壁生長
產品規格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養溫度(℃)37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 |
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒Human acidic fibroblast growth factor 1,aFGF-1 ELISA Kit
人凋亡相關因子配體(FASL)ELISA試劑盒Human Factor-related Apoptosis ligand,FASL ELISA Kit
人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒Human Factor-related Apoptosis,FAS ELISA Kit
人嗜粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒Human Eotaxin 1 ELISA Kit
人內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒Human Endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF ELISA Kit
人睫狀神經營養因子(CNTF)ELISA試劑盒Human Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF ELISA Kit
人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒Human CXC-chemokine receptor 1,CXCR1 ELISA Kit
人XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA試劑盒Human XC-chemokine receptor 1,XCR1 ELISA Kit
人二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)ELISA試劑盒 Human secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC ELISA Kit
人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒Human E-Cadherin,E-Cad ELISA Kit
人腦源性神經營養因子(BDNF)ELISA試劑盒Human Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA Kit
人神經調節蛋白1(NRG-1)ELISA試劑盒human Neuregulin 1,NRG-1 ELISA Kit
人多巴D2受體(D2R)ELISA試劑盒Human dopamine D2 receptor,D2R ELISA Kit
人神經元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA試劑盒 Human neuronal apoptosis inhibitory protein,NAIP ELISA Kit
人食欲/阿立新B(OX-B)ELISA試劑盒Human Orexin B,OX-B ELISA Kit
人促睡眠(DSIP)ELISA試劑盒Human delta sleep-inducing peptide,DSIP ELISA Kit
加壓(AVP)ELISA試劑盒 Human arginine vasopressin,AVP ELISA Kit
人垂體腺環化激活(PACAP)ELISA試劑盒Human pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA Kit
人微管相關蛋白2(MAP-2)ELISA試劑盒Human microtubule-associated protein 2,MAP-2 ELISA Kit
小鼠骨肉瘤成骨細胞+LUCphospho-TCF3/E2A/E47(Ser39) 磷化轉錄因子3抗體 0.1ml
IgHV/IgH 免疫球蛋白重鏈可變區抗體 0.2ml
Mammaglobin A 乳腺珠蛋白1抗體 0.2ml
ADK/AK 腺激抗體 0.1ml
AEG-1/LYRIC AEG-1抗體 0.2ml
AMH/MIS Muellerian繆勒管抑制因子抗體 0.2ml
Glutaminase 抗體 0.2ml
Visfatin-1(CT) 內脂/內臟脂肪(C端抗體) 0.1ml
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