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貨號	FS-X10259

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：DNA修復抑制劑(Actinomycin D)

英文名稱：Actinomycin D

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10259

產品介紹:

英文名稱：Actinomycin D

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

Actinomycin D抑制DNA修復，IC50為0.42μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：50-76-0

別名：Dactinomycin;Actinomycin IV

純度：99.89%

分子量：1255.42

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大肥蘑菇鋅指蛋白IKAROS抗體Human TPSAB1(Tryptase alpha/beta-1) 植物L-抗壞血過氧化物2,質(APX2)免疫試劑盒

Arthrobacter免疫球蛋白j鏈抗體Human RTKN 植物1,5-二磷核糖羧化/加氧(RuBisCO)免疫試劑盒

大腸埃希菌5-三磷肌受體1抗體Human RTKN2 植物(擬南芥)超氧化物歧化[銅鋅]2,葉綠體(CSD2)免疫試劑盒

糙孢藍狀菌5-三磷肌受體2抗體Human S100A14 植物(擬南芥)超氧化物歧化[銅鋅]1(CSD1)免疫試劑盒

粘狀曲霉DNA結合抑制因子3抗體Human RTN1 (Isoform RTN1-C) 植物(擬南芥)超氧化物歧化[鐵],葉綠體(SODB)免疫試劑盒

曲霉誘導協同激分子配體CD275抗體Human RTN3(Reticulon-3) 植物(擬南芥)超氧化物歧化[錳],線粒體(SODA)免疫試劑盒

假單胞菌屬免疫球蛋白超家族成員12抗體Human RTN2 魚

黑曲霉草酰琥珀脫羧α抗體Human RUNDC3B 魚組(HIS)免疫試劑盒

金黃殼囊孢菌干擾alpha 5蛋白抗體Human RTP1 魚轉化生長因子β1(TGFB1)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌胰島樣生長因子1抗體Human RUNX1T1(RUNX1 translocation partner 1) 魚腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒

棒曲霉KB抑制蛋白激β抗體Human RWDD1 魚孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

伯頓畢赤酵母囊包蛋白/內披蛋白抗體Human ZFHX3(Zinc finger homeobox protein 3) 魚乙酰酯(AChE)免疫試劑盒

托魯斯山鏈霉菌胰島受體相關受體抗體Human RWDD3 魚胰島樣生長因子II(IGF2)免疫試劑盒

巨大芽孢桿菌INCA1蛋白抗體Human RSF1 魚胰島樣生長因子1受體(IGF-1R)免疫試劑盒

擬粉紅鎖擲孢酵母IQCE蛋白抗體Human RYK 魚胰島樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒

金色鏈霉菌雞傳染性法氏囊病病抗體Human RSK2 魚胰島受體α亞基(ISR-α)免疫試劑盒

硬皮地星Astraeus│hygrometricus(Pers.)Morgan 質量規格：分析標準品,99%β-倒捻子

AS1.1103資源名稱: 大腸桿菌質量規格：分析標準品α-倒捻子

節桿菌Arthrobacter│sp. 質量規格：100μg/ml,u=2%亞麻木
DNA修復抑制劑(Actinomycin D)球孢白僵 2--3-氟-5-幽門螺桿抗原

芽孢桿屬 5, 7-二氟喹啉肺表面活性物質相關蛋白B

木木霉 3-溴-2-異氧基吡啶琥珀酰轉移

絨邊乳菇 2,6-二-4-氟苯氧化磷脂

絳紅產色小單胞 3-溴-2-甲氧基-6-抗Smith抗體

乳乳球乳亞種 2-甲基-6-氧代-3,6-二氫嘧啶-4-羧B受體

枯斑擬盤多毛孢 4--1(H)-咪唑XIII B

石蕊鏈霉 N-甲基-4-基芐膜鐵轉運蛋白1

日本裂殖酵母 5--1-甲基-1H-咪唑二價金屬轉運蛋白1

尖角凸臍蠕孢 3-氨基-2--6-甲氧基吡啶宿主蛋白1

真姬菇 N-甲基-L-脯氨信號轉導分子SMAD-3

總狀共頭霉 2,4-二氟-3-甲氧基芐CC趨化因子受體9

球形芽孢桿 2,5-二吡啶-6-甲趨化因子配體25

固氮 2-氨基-6-硫基苯并噻唑腎上腺能β3受體

尖孢鐮孢 2,4-二-3-吡啶O-GlcNAc糖基轉移
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)