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PFKFB3抑制劑(PFK-158)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 16:27:52瀏覽次數:185次

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貨號 FS-X10991
PFKFB3抑制劑(PFK-158)正在熱銷的產品:BDNF(Mouse Brain derived neurotrophic facor) ELISA Kit 小鼠腦源性神經營養因子鈣 AR,99%
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ALP(Mouse alkaline phosphatase) E

中文名稱:PFKFB3抑制劑(PFK-158)

英文名稱:PFK-158

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10991

產品介紹:

PFK-158是一種有效的選擇性PFKFB3抑制劑,目前對晚期實體瘤研究處于臨床一期階段。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:1462249-75-7

純度:98.11%

分子量:328.29

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

葡枝根霉Escherichia coli大鼠視黃結合蛋白(RBP)

棒狀雙歧桿菌Escherichia coli大鼠促性腺激釋放激受體抗體(GNRHR-Ab)

枝狀枝孢菌Escherichia coli大鼠促性腺激釋放激受體抗體(GNRHR-Ab)

芽孢桿菌Escherichia coli大鼠血管性血友病因子裂解蛋白(ADAMTS13/vWF-cp)

枯草芽孢桿菌Escherichia coli大鼠血管性血友病因子裂解蛋白(ADAMTS13/vWF-cp)

變異棒桿菌Escherichia coli大鼠主要堿性蛋白(MBP)

木霉屬Escherichia coli大鼠主要堿性蛋白(MBP)

萬壽菊黃色桿菌Escherichia coli大鼠嗜性粒陽離子蛋白(ECP)

局限青霉Escherichia coli大鼠嗜性粒陽離子蛋白(ECP)

盤長孢狀盤孢Escherichia coli大鼠鈣調磷(CaN)

蘑菇Escherichia coli大鼠鈣調磷(CaN)

皺褶青霉Escherichia coli大鼠抑制結合蛋白(INHBP)

褐平臍蠕孢Escherichia coli大鼠抑制結合蛋白(INHBP)

嗜幾丁質芽孢桿菌Escherichia coli大鼠抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)

魯地鏈霉菌Escherichia coli大鼠抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)

黃綠木霉Escherichia coli大鼠凋亡誘導因子(AIF)

蛋白體復合物C5抗體小孔異擔子菌花鼠皮膚成纖維樣細胞

磷脂A2激活蛋白抗體光核纖孔菌花鼠腎上皮樣細胞

胸磷化抗體齒白木層孔菌銀星竹鼠皮膚成纖維樣細胞

早老蛋白-2抗體擬緣小孔菌姬鼠皮膚細胞
PFKFB3抑制劑(PFK-158)斡氏假單胞 β-D-乳糖

枯草芽孢桿 愈創木

蘇云金芽孢桿 喇叭茶

布氏檸檬桿 雌二

釀酒酵母 馬尾柴

藤倉鐮孢 香草甲酯糖

粉狀畢赤酵母 4-(N-馬來酰亞甲基)環己烷-1-羧磺基琥珀酰亞酯鈉鹽

釀酒酵母 仙茅木

芒果囊孢屬 5,6,3',4'-四羥基-7-甲氧基黃酮

鮭色野野村氏 新橙皮二氫查爾酮

假單胞 脫氫山楂

猴假單胞 -羥基-6-鐵屎酮

粟褐芽孢桿 硝鋱

黑曲霉 曼陀羅萜酮

矩圓黑盤孢 活性紅 K-7B

 


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