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實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
產品名稱 | 分類 | 貨號 |
犬巴貝斯蟲(Bab)核酸檢測試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10349 |
PCR技術的定量原理:?
擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,最終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據最終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
BCRC13377=DSM43859=IFO14371=KCTC9745=KCTC模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Kitasatospora│griseola土壤提供形式: 凍干物模式菌株;產生setamycine培養基: 0038
硫氧化湖沉積桿菌有機污染物降解菌/多環芳烴(PAHs)降解菌模式菌株: no沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 471生長條件: 25℃
青色鏈霉菌生長條件: 28℃培養基: 0012提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
聚生殼菌培養基: 14模式菌株: no種子提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 25 -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;定期移植法
戊糖片球菌培養基: 6模式菌株: no發霉谷子提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 24℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他
鐮孢生長條件: 25-28℃培養基: 0014提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
-375℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
熱帶假絲酵母培養基: CM0077固體發酵釀酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法
球毛殼生長條件: 20-25℃培養基: 0014提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
結核分枝桿菌生長條件: 37℃研究提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no 真空冷凍干燥法
茄絲核菌培養基: 14模式菌株: no馬尾松提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 26 定期移植法
ATCC29358質量控制菌株模式菌株: no種屬: Pediococcusdamnosus拉格啤酒酵母安全等級: 1生長條件: 26℃
節桿菌屬培養基: CM0002模式菌株: no冬蟲夏草菌膜提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
-376℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
鏈霉菌屬菌種抗黑曲霉模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0027生長條件: 28C
考克氏菌生物轉化微生物/硫氧化微生物 產酶微生物/蛋白酶模式菌株: no沉積物/TVG含礦沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 471生長條件: 25℃
丹寧Tannic acidAR500g
B5002-100mg5-溴-2-脫氧尿苷59-14-3100mg46
0122-500GD-Mannitol D-甘露醇69-65-8500g
DAPI Staining Solution
2-(N-嗎非啉)乙磺25g
環氧丙烷¤EpoxypropaneGCS5ml
SM0623O`RangeRuler 100bp DNA Ladder, ready-to-use177
G8772-50GGlass beads,acid-washed 玻璃珠/50g
檸檬三鈉(枸櫞三鈉)100g
X-Gluc50mg
大鼠血幼素(HJV)ELISA試劑盒 ,英文名: HJV ELISA Kit
Duck IgG (aPT1/aPT2) ELISA Kit 鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒
Mousebasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISAKit 小鼠堿性成纖維生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanCollagenaseTypeIIELISAKit人膠原酶II規格:48T/96T
CDK2/CYCLINA激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitU-TSH大鼠高靈敏度促甲狀腺激素規格:48T/96T
犬巴貝斯蟲(Bab)核酸檢測試劑盒CAYE培養基規格:250g用途:用于致病性大腸埃希氏菌的產培養
妥布霉素藥敏紙片規格:10ug/片,20片/瓶拉丁屬名:Tobramycin(TM)
甲基綠規格:5g用途:微生物指示劑
LB瓊脂(lennox)規格:250g用途:用于分子生物學中大腸桿菌的培養
幽門螺旋桿菌添加劑規格:1ml*5用途:每支添加于93ml幽門螺旋桿菌培養基中
液體硫乙醇鹽培養基(不含瓊脂)規格:250g用途:用于混濁制品需氧菌無菌試驗
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