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貨號	FS-X10812

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：TRPV4激活劑(GSK1016790A)

英文名稱：GSK1016790A

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10812

產品介紹:

GSK101(GSK1016790A)是一個新穎的TRPV4激活劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：942206-85-1

純度：98.07%

分子量：655.61

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

葡萄座腔菌小鼠血小板因子3Anti-NTS Antibody大鼠一氧化氮(NO)

福氏志賀氏菌大鼠胰島自身抗體Anti-NUB1 Antibody大鼠一氧化氮(NO)

釀酒酵母人血管內皮生長因子受體1Anti-NUMA1 Antibody人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)

熒光假單胞菌生物型F小鼠白介2受體Anti-NUP35 Antibody人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)

魯氏酵母大鼠抗核膜糖蛋白210抗體Anti-NUP93 Antibody人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)

諾爾氏菌屬小鼠腎上腺髓質Anti-NUP160 Antibody人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)

釀酒酵母大鼠可溶性Toll樣受體6Anti-NUP88 Antibody人脂聯(ADP)

新疆黃桿菌人血管內皮生長因子ti-NUSAP1 Antibody人脂聯(ADP)

紅蠟盤菌人血管內皮生長因子CAnti-NUTF2 Antibody人組(HIS)

根瘤菌大鼠可溶性Toll樣受體2Anti-NVL Antibody人組(HIS)

東方伊薩酵母小鼠可溶性瘦受體Anti-NUTM1 Antibody人抵抗(Resistin)

湖沉積物紫色小桿菌人血管內皮生長因子BAnti-NXF1 Antibody人抵抗(Resistin)

盤多毛孢大鼠前列腺F2αAnti-NXF3 Antibody人骨特異性堿性磷B(ALP-B)

不動桿菌小鼠β內啡肽受體Anti-NXF1(TAP) pAb人骨特異性堿性磷B(ALP-B)

辣乳菇人血管內皮生長因子Anti-NXPH3 Antibody人骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

白僵菌大鼠白三烯E4Anti-NXPH1 Antibody人骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

視網膜感光細胞外節膜蛋白1抗體茶新菇ACH-4人肝母細胞瘤細胞

DNA修復蛋白Rad50抗體紫褐牛肝菌小鼠結腸癌細胞

RecQ解旋樣蛋白5抗體污膠鼓菌人結直腸腺癌細胞

單鏈結合蛋白70抗體杯蕈2號大鼠乳腺癌細胞
TRPV4激活劑(GSK1016790A)新月梅奇酵母抗氧劑1076巨噬炎性蛋白-1α

樟疫霉 2-噻吩乙卵清蛋白特異性IgE抗體

盞芝小孔 5-溴吡啶-3-甲球蛋白E

E.coli DB3.1 3-延胡氨基酯球蛋白G

芭蕉本森頓酵母 2-溴異丁酰溴球蛋白M

河北鏈霉 (R)-(-)-扁桃甲酯膜攻擊復合物

秦氏蜜環 5-溴戊內皮1

大豆慢生根瘤 3-氨基苯內皮轉化1

諾爾斯氏鏈霉苯氧乙甲酯黏蛋白

產氮假單胞 4-丁基前列環

釀酒酵母水楊丁酯前列腺E2

鮭色鎖擲酵母 2-溴聯苯前列腺特異性抗原

小麥全蝕病 MRS肉湯羥脯

節桿雙歧桿BS培養基趨化因子配體21

美麗鹽單胞化血紅趨化因子配體25
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)