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實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
產品名稱 | 分類 | 貨號 |
馬鏈球菌(S. equi)核酸檢測試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10354 |
PCR技術的定量原理:?
擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,最終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據最終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
糙皮側耳(平菇)培養基: 0014食用、藥用提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ -80℃冰箱凍結法
柴油食烷菌有機污染物降解菌/石油烴類降解菌模式菌株: no水樣/近海海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 821生長條件: 28℃
河生腸桿菌培養基: 832模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
-386℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
芽胞桿菌無機污染物抗性菌/抗二價鉛Pb 產酶微生物/ 蛋白酶、淀粉酶、脂酶(三丁甘油酯)模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 472生長條件: 28℃
百日咳博德特氏菌生長條件: 37℃培養基: CM0119提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法
郎伍德鏈霉菌培養基: 12可用于抗菌活性及抗腫瘤活性研究土壤/近海紅樹林土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
猴頭菇食用菌模式菌株: no組織塊提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: PDA 培養基:馬鈴薯提取液 1.0 L,葡萄糖 20.0 g,瓊脂 15.0 g,自然pH生長條件: 25-30℃,好氧
AS2.126酒精。模式菌株: no種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0077生長條件: 28-30℃
鏈霉菌屬菌種抗耐藥細菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0027生長條件: 28C
-387℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
葡萄座腔菌 定期移植法生長條件: 25-28提供形式: 斜面培養物模式菌株: no培養基: 14
大西洋假絲酵母共生微生物/魚類共生菌模式菌株: no生物樣/鰶 頭皮提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 513生長條件: 28℃
頂孢頭孢霉生長條件: 25培養基: 14蘋果果實提供形式: 斜面培養物模式菌株: no 定期移植法
紡錘單頂孢培養基: 18模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 25-28℃
釀酒酵母培養基: CM0013用于啤酒提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法
對本二酚xy7noinoneoneAR250g
G8140Goldview I型核染色劑1ml151
G7250-1GD-Glucose-6-phosphate Na2 D-葡萄糖-6-磷二鈉 (羅比森酯)3671-99-61g
EDTA抗原修復液(50X)100ml
metxyl Green, Zinc Chloride Salt25g
甲基環己烷metxyl cyclohexaneGCS2ml
LBI01兔抗鼠IgG314
CB2531-10GBenzamidine xy7nochloride 鹽本甲脒(芐脒)1670-14-010g
Con A100mg
Yeast Extract100*500g
大鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷磷(NAADP)ELISA試劑盒 ,英文名: NAADP ELISA Kit
Mouse thrombin receptor () ELISA Kit 小鼠凝血酶受體()ELISA試劑盒
MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 小鼠紅生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanCompleme4,C4ELISAKit人補體蛋白4規格:48T/96T
EINKINASE1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitLebtospira大鼠鉤端螺旋體IgG規格:48T/96T
馬鏈球菌(S. equi)核酸檢測試劑盒D-核糖規格:25g用途:微生物指示劑
假單胞cfc選擇性培養基添加劑規格:1ml/支*5用途:每支添加于200ml HB8689中
改良愛德華瓊脂基礎規格:250g用途:用于牛炎鏈球菌的選擇性分離培養
TNM-FH昆蟲培養基規格:500mL詳情介紹
緩沖蛋白胨水(BPW)規格:300ml/袋*10用途:用于阪崎桿菌前增菌培養 (GB標準)
淀粉-雙岐桿菌鑒定規格:20支詳情介紹
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