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貨號	FS-X10487

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：不可逆抑制劑(Pentostatin)

英文名稱：Pentostatin

產品規格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10487

產品介紹:

英文名稱：Pentostatin

產品規格：1mL(10mM)|10mg|50mg

Pentostatin是一種高效的adenosine deaminase的不可逆抑制劑，Ki值為2.5pM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：53910-25-1

別名：Deoxycoformycin

純度：99.77%

分子量：268.27

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜中溫居冰菌磷化絲/蘇蛋白激39抗體Anti-FGF8 Antibody血管內皮蛋白C受體(PROCR)

枯草芽孢桿菌磷化轉錄生長因子SP1抗體Anti-FGFR1 Antibody血管內皮生長因子受體3(VEGFR3)

Pseudomonas oryzihabitans分選連接蛋白4抗體Anti-FGF8 Antibody血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)

菜豆間座殼分選連接蛋白9抗體Anti-FGF9 Antibody血管內皮生長因子受體1(VEGFR1)

克魯斯假絲酵母分選連接蛋白10抗體Anti-FGFR2 Antibody血管內皮生長因子D(VEGFD)

灰色鏈霉菌銹色變種分選連接蛋白11抗體Anti-FGFR1 Antibody血管內皮生長因子C(VEGFC)

地衣芽孢桿菌分選連接蛋白6抗體Anti-FGFR2 Antibody血管內皮生長因子B(VEGFB)

威特弗拉里亞鞘盒菌生成相關蛋白3抗體Anti-FGR Antibody血管內皮生長因子A(VEGFA)

馬德里毛殼磷化非受體酪激c-Abl抗體Anti-FGG Antibody血管內皮生長因子165(VEGF165)

花生根瘤菌SRC有絲分裂相關蛋白68抗體Anti-FGFR4 Antibody血管內皮生長因子145(VEGF145)

肉質鏈霉菌SH3BGRL2蛋白抗體Anti-FH Antibody血管內皮鈣黏蛋白(CDH5)

戈登氏菌（加詞待譯）鈉離子通道相關蛋白1抗體Anti-FHIT Antibody血管緊張Ⅲ(AngⅢ)

食石油類諾卡氏菌SH3結構域激結合蛋白1抗體Anti-FHL1 Antibody血管緊張Ⅱ受體2(AGTR2)

桃中田殼小圓孢菌Src家族相關磷化蛋白2抗體Anti-FHL1 Antibody血管緊張Ⅱ受體1(AGTR1)

釀酒酵母SLAP2抗體Anti-FHL3 Antibody血管緊張Ⅰ(AngⅠ)

布氏假單胞菌淋巴胞漿蛋白2抗體Anti-Fibronectin(FN1) Antibody血管緊張1-9(Ang1-9)

鈣周期結合蛋白抗體解酯假絲酵母解酯變種THP-1人急性白血病單核巨噬細胞株

葡萄糖-6磷轉運蛋白抗體綠曲霉C2C12小鼠成肌細胞系

SNAPC3蛋白抗體褐單梗曲霉CHL倉鼠肺細胞

泛相關修飾蛋白特異性蛋白5抗體間型脈孢菌CT26.WT小鼠結腸癌細胞
不可逆抑制劑(Pentostatin)美澳型核果褐腐病 Phe-Phe磷化混合譜系激域樣蛋白

豬丹絲聚(乙二)甲基烯酯甲基化

雅致栓孔 3,4-二甲基二苯甲酮二酰基甘油酰基轉移

東方伊薩酵母 L--15NCD47分子

白淺灰鏈霉 L--15NCD42D分子

納瓦河部落奇異球 3-(三氟甲基)芐基硫磷烯式酮

綠色鏈霉 (S)-4-氨基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁生長促分泌受體

小孔異擔子氮化鋯磷化鈣調依賴性蛋白激IV

洛格酵母聚乙烯吡咯烷酮絡合物組三聚體核結合蛋白2

黑曲霉 2,3-二氟-4-甲氧基苯甲丁酰酯

貝倫格勒座腔梨專化型 2,6-二氟-4-甲氧基苯甲單核趨化蛋白5

海南吉爾霉氮化銦(III)球蛋白D

pLCDH-ciR 氮化鎵心肌肌凝蛋白抗體

甜芝(靈芝屬之一種) 去甲托品酮鹽鹽金黃色葡萄球

谷棒桿Ⅲ型 2-(二-叔丁膦)-2'-甲基聯苯促吞噬肽
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)