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貨號 | FS-X10485 |
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產品介紹:
英文名稱:EPZ015666 產品規格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg EPZ015666是一種有效的PRMT5酶活性抑制劑,IC50為22nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1616391-65-1 純度:98.56% 分子量:383.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
英文名稱:EPZ015666
產品規格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10485
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中國克魯維酵母淋巴管內皮和血管內皮受體1抗體Anti-Ferritin Antibody血栓烷受體(TP)
露濕漆斑菌鞭毛蛋白2抗體Anti-FES Antibody血栓A2(TXA2)
硬結節桿菌跨膜蛋白SEMA5A抗體Anti-FFAR1 Antibody血色病蛋白(HFE)
香菇IQCJ抗體Anti-FGA Antibody血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)
糞腸球菌*SH2結構域蛋白C3抗體Anti-FGA Antibody血清淀粉樣P物質(SAP)
日本色鹽桿菌2型豬鏈球菌溶血抗體Anti-FGB Antibody血漿過氧化物(GPX3)
解鳥克雷伯菌肺表面活性蛋白A抗體Anti-FGF1 Antibody血紅氧合2(HO2)
綠色鏈霉菌肺表面活性蛋白A抗體Anti-FGF1 Antibody血紅氧合1(HO1)
多粘類芽孢桿菌葡萄糖-6磷轉運蛋白抗體Anti-FGF1 Antibody血紅結合蛋白(HPX)
枯草芽孢桿菌線粒體琥珀脫氫D抗體Anti-FGF1 Antibody血紅蛋白μ(HBμ)
叢毛紅曲類固硫酯抗體Anti-FGF10 Antibody血紅蛋白θ1(HBθ1)
腐質霉固調節元件結合蛋白裂解激活蛋白抗體Anti-FGF10 Antibody血紅蛋白ζ(HBζ)
傘枝犁頭霉轉運蛋白家族39成員7抗體Anti-FGF13 Antibody血紅蛋白ε1(HBε1)
迪吉氏黃桿菌碳氫鈉協同轉運蛋白4-A4突變型抗體Anti-Fgf19(Fgf15) Antibody血紅蛋白δ(HBδ)
木賊鐮刀菌磷化認知缺陷突觸相關蛋白SynGAP抗體Anti-FGF19 Antibody血紅蛋白γ2(HBγ2)
Sphingobium fuliginis Syndecan 3蛋白抗體Anti-FGF19 Antibody血紅蛋白γ1(HBγ1)
染色體結構維持蛋白2抗體空腸彎曲菌hFoB1.19:SV40轉染人成骨細胞
染色體結構維持蛋白5抗體液化MGC80-3人胃癌細胞
染色體結構維持蛋白6抗體黑曲霉 ACHN人腎癌細胞
SLAMF6抗體淺白隱球酵母3T3-L1小鼠脂肪細胞
PRMT5酶活性抑制劑(EPZ015666)豬瘟病間接抗體 3,5-二羥基苯甲核磷化
細麗擬盤多毛孢 六甘縮
釀酒酵母 3--2-氟磺脲類藥物受體
花楸盤多毛孢 5-甲氧基水楊轉化受體電位陽離子通道亞家族M成員4
果生鏈核盤 BOC-L-2-溴苯山梨脫氫
厄氏 N-乙基-2-氨甲基吡咯烷肌分化因子
核盤 Otilonium Bromide生肌因子5
枯草芽孢桿 L-(-)-α-氨基-ε-己內酰鹽鹽神經鞘磷脂
金黃色葡萄球 聚二烯二甲基化溶液核糖核A
伯頓生絲畢赤酵母 聚二烯二甲基化溶液核呼吸因子2
平菇 聚二烯二甲基化溶液二?;视王;D移2
香菇 聚二烯二甲基化溶液二?;视王;D移1
枯草芽孢桿 3-苯基-1H-吡唑-4-甲木聚糖
毛栓孔 2,3-二磷核糖焦磷
芽胞桿 八甘單甲單羧轉運蛋白
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