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貨號	FS-X10817

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：拓撲異構酶I和II抑制劑（TAS-103雙鹽酸鹽）

英文名稱：TAS-103 dihydrochloride

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10817

產品介紹:

TAS-103(BMS-247615)雙鹽酸鹽是拓撲異構酶I和II的抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：174634-09-4

別名：BMS-247615 dihydrochloride

純度：98.53%

分子量：406.31

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜麥芽黃單胞菌小鼠網膜Anti-OR14J1 Antibody人尿二磷葡萄糖神經酰葡萄糖基轉移(UGCG)

被孢菌屬大鼠生長激釋放肽ghrelinAnti-OR1D5 Antibody人尿二磷葡萄糖神經酰葡萄糖基轉移(UGCG)

孟氏假單胞菌人神經營養因子3Anti-OR1D2 Antibody人尿二磷葡萄糖神經酰葡萄糖基轉移(UGCG)

HIV假病 Z20-11人的神經生長因子Anti-OR1B1 Antibody人尿二磷葡萄糖神經酰葡萄糖基轉移(UGCG)

紡錘形賴芽孢桿菌小鼠孤腓肽Anti-OR1D5 Antibody人凋亡相關半胱肽4(Casp4)

卷枝毛霉大鼠內臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑Anti-OR1L6 Antibody人凋亡相關半胱肽4(Casp4)

巨型艾美耳球蟲人的神經生長因子-βAnti-OR1S2 Antibody人吡哆/吡哆維生B6激(PDXK)

谷棒桿菌人巨噬炎性蛋白3βAnti-OR1N1 Antibody人吡哆/吡哆維生B6激(PDXK)

草菇小鼠蛋白磷Anti-OR2A14 Antibody人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)

大鼠溴脫氧核Anti-OR1S2 Antibody人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)

銅綠假單胞菌大鼠轉化生長因子β2Anti-OR2A14 Antibody人血清/糖皮質激調節激2(GSK2)

構巢曲霉人巨噬炎性蛋白3αAnti-OR2A1; Antibody人血清/糖皮質激調節激2(GSK2)

家園鬼傘小鼠硫氧還蛋白還原Anti-OR2A25 Antibody人絲裂原活化蛋白激激6(MKK6)

杏鮑菇小鼠硫氧化還原蛋白Anti-OR2A1; Antibody人絲裂原活化蛋白激激6(MKK6)

蘇云金芽孢桿菌大鼠色P4502E1Anti-OR2A25 Antibody人吡哆/吡哆維生B6磷(PDXP)

熱帶頭梗霉人巨噬炎性蛋白1βAnti-OR2A7 Antibody人吡哆/吡哆維生B6磷(PDXP)

原癌基因R-Ras抗體豬苓小鼠乳腺癌細胞

環指蛋白133抗體紅菇屬恒河猴胚腎細胞

環指蛋白35抗體香灰菌（138）(無法提供）人膀胱癌細胞

環指蛋白130抗體#金福菇小鼠淋巴樣瘤細胞
拓撲異構酶I和II抑制劑（TAS-103雙鹽酸鹽）鼎湖鱗傘（只能確定到屬）麥康凱瓊脂2號色P45027B1

謝瓦曲霉纖維剛果紅培養基可溶性血管內皮生長因子受體1

鴨瘟病抗血清姜氏培養基（不含瓊脂）可溶性FMS樣酪激1

草青霉姜氏瓊脂培養基游離甲狀腺

玫瑰產色鏈霉解磷細培養基（有機磷細培養基）游離狀腺原

光帽鱗傘固氮根瘤培養基可溶性CD44變體9

水稻節桿聯合固氮培養基Periostin蛋白

木霉固氮用阿須貝氏培養基X-框結合蛋白1

黃色雙孢放線無機磷細培養基肌依賴1α

節桿去氧膽鹽枸櫞鹽乳糖蔗糖瓊脂總膽汁

墳墓節桿 Honda氏產肉湯尿

樟疫霉明膠蛋白胨肌酐

貴州青霉玉浸粉尿氮

芥黃蜜環 MPC瓊脂培養基白介23

耐酪冢村接觸皿培養基白介22
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)