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貨號 | FS-X10218 |
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中文名稱:Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制劑)
英文名稱:Caspase 4 Inhibitors Z-VAD-FMK
產品規格:20μl
貨號:FS-X10218
產品介紹:
英文名稱:Caspase 4 Inhibitors Z-VAD-FMK 產品規格:20μl 濃度:5mM in DMSO 分子式:C21H28FN3O7 分子量:453.5 含量:77~97%(TLC) 純度:≥92%(HPLC) 儲存:-20℃,有效期6個月 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
蕈狀芽孢桿菌胰高血糖樣肽-1抗體Human Syntaxin 6 大鼠基質金屬蛋白7(MMP-7)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌顆粒蛋白前體抗體Human TADA2B 大鼠基質金屬蛋白5(MMP-5)免疫試劑盒
硬結節桿菌磷脂酰基蛋白聚糖1抗體Human STX1A(Syntaxin-1A) 大鼠基質金屬蛋白4(MMP-4)免疫試劑盒
鞘菌糖原合激3α抗體Human TADA2L 大鼠基質金屬蛋白3(MMP-3)免疫試劑盒
*灰葡萄孢慶大霉單克抗體Human TADA3L 大鼠基質金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒
糞腸球菌硫轉移ω1抗體Human TAF1L 大鼠基質金屬蛋白14(MMP-14)免疫試劑盒
毛霉屬間隙連接蛋白31抗體Human TAF1 大鼠基質金屬蛋白13(MMP-13)免疫試劑盒
弓形蟲(GJS-3株)甘-N-甲基轉移Human TAF3 大鼠基質金屬蛋白10(MMP-10)免疫試劑盒
北京擲孢酵母G蛋白偶聯受體75抗體Human TAF7 大鼠基質金屬蛋白1(MMP-1/Collagenase I)免疫試劑盒
蓋替隱球酵母GATA結合蛋白4抗體Human TAF6L 大鼠肌質網膜鈣ATP(SERCA)免疫試劑盒
淺灰小雙孢菌兔抗γ1基丁抗體Human TAF5L 大鼠肌激同工MM(CK-MM)免疫試劑盒
廣西腐霉G蛋白偶聯受體GPR85蛋白抗體Human DNASE1(Deoxyribonuclease-1) 大鼠肌激同工MB(CK-MB)免疫試劑盒
黑曲霉慶大霉抗體Human TAF9(Transcription initiation factor TFIID subunit 9) 大鼠肌激同工BB(CK-BB)免疫試劑盒
空腸彎曲桿菌半乳糖凝集9抗體Human TAF9B 大鼠肌球蛋白(MYS)免疫試劑盒
緣毛殼促代謝型谷受體2+4抗體Human Syntaxin 10 大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒
鞘桿菌GPNMB抗體Human STX1A(Syntaxin-1A) 大鼠肌酐(Cr)免疫試劑盒
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規格:分析標準品,99%黃杞
天麻萌發菌Mycena│sp. 質量規格:分析標準品,≥99.5%(GC)晶蘭
豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒Arterivirus│Porcine respiratory and reproductive syndrome virus 質量規格:分析標準品8-O-乙酰山梔酯
Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制劑)橙色單胞 1,1-環烷二甲果糖
糞產堿桿* 2-環己基-2-羥基硫化氫
旱生紅曲霉 4-乙氧羰基苯抗肽LL-37
空腸彎曲桿 2,2,2-三氟乙基對甲苯磺酯血管緊張II
熒光假單胞桿 6-(5--2-吡啶基)-5H-吡咯并[3,4-b]吡-5,7(6H)-二酮過氧化物
大腸埃希 支原體
金針菇—金白1號 4,6-二-5-硝基嘧啶泰澤病原體
Actinomadura amylolytica 1,1-二溴-3,3,3-三氟酮弓形蟲
糙皮側耳 2-酰噻唑呼腸弧病3
小麥蒼白桿 叔丁氧羰基氨氧基乙肝炎病
栗疫 1-丁基-2-甲基肺炎病
腐生葡萄球 4--6-甲氧基喹啉鼠痘病
豇豆慢生根瘤 2-溴-4甲基芐細小病
大腸埃希氏 1-庚烷蛋白質羰基
耶爾森氏 3,4-噻吩二羧8-異構前列腺
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