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貨號	FS-X10891

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：HDAC6抑制劑（Tubastatin A鹽酸鹽）

英文名稱：Tubastatin-A

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10891

產品介紹:

Tubastatin A鹽酸鹽是HDAC6選擇性抑制劑，IC50為15nM，比對其它亞型的抑制性高1000倍(相對HDAC8是57倍)。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1252003-15-8

純度：99.05%

分子量：335.4

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蘇云金芽孢桿菌大鼠干因子受體Anti-SSBP1 Antibody人凝血抗凝血復合物(TAT)

綠色木霉大鼠基質衍生因子1βAnti-SSBP2 Antibody人抗凝血受體(ATR)

茶樹菇人落葉型天皰瘡抗體Anti-SSTR4 Antibody人抗凝血受體(ATR)

大腸埃希菌人β2糖蛋白1抗體IgAAnti-SSX1 Antibody人凝血受體(TR)

孢小克銀漢霉大鼠血管生成受體Tie1Anti-SSH3 Antibody人凝血受體(TR)

地衣芽孢桿菌大鼠含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激2Anti-ST18/Znf387 Antibody人第八因子相關抗原(FⅧAg)

山茶盤孢人抗心磷脂抗體IgAAnti-SSH3 Antibody人第八因子相關抗原(FⅧAg)

枯草芽孢桿菌枯草亞種大鼠基質金屬蛋白抑制因子2Anti-ST3GAL3 Antibody人血纖蛋白原(Fbg)

淡紫擬青霉人β2糖蛋白1抗體IgMAnti-STAC2 Antibody人血纖蛋白原(Fbg)

耐堿放線孢菌人β2糖蛋白1抗體IgGAnti-ST6GAL1 Antibody人主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)

Bacillus tequilensis大鼠基質金屬蛋白抑制因子3Anti-STARD Antibody人主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)

粟酒裂殖酵母大鼠基質金屬蛋白抑制因子4Anti-STARD13 Antibody人抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)

黑曲霉人抗心磷脂抗體IgMAnti-STEAP2 Antibody人抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)

乙鈣不動桿菌人抗心磷脂抗體IgGAnti-STEAP4 Antibody人血栓前體蛋白(TpP)

大腸埃希氏菌大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體ⅠAnti-STARD13 Antibody人血栓前體蛋白(TpP)

產短桿菌人抗高爾基體抗體Anti-STEAP3 Antibody人淋巴功能相關抗原3(LFA-3/CD58)

甲狀腺激反應蛋白抗體天麻蜜環菌（京-234）抗P24蛋白單抗7

跨膜蛋白49抗體茯苓578抗人大腸癌單抗7

腫瘤/睪丸抗原20抗體黑木耳(東A-3)抗人微管蛋白-alpha單抗7

腫瘤蛋白D54蛋白抗體散囊菌抗人醛羧A單抗7
HDAC6抑制劑（Tubastatin A鹽酸鹽）釀酒酵母 5--8-羥基-7-喹啉磷化酪激

山夫頓堡沙門氏鈦/Ti酮氧化

匍匐曲霉原變種碲/Te胰島受體α

大杯香菇鉭/Ta囊尾蚴抗體

解脂假絲酵母鍶/Sr高致病性藍耳病抗體

解淀粉芽孢桿錫/Sn超氧化物歧化

Rathayibacter caricis 硅根/SiO32-脂質運載蛋白-2

棒黃曲霉二氧化硅/SiO2過氧化6

靈芝硅/SiN-乙酰-β-D-氨基葡萄糖

雞腿菇cc968 硒/Se總蛋白

越桔假絲酵母鈧/ScS0鈣結合蛋白A9

黑曲霉銻/Sb可溶性Endoglin

釀酒酵母 1-(4-基苯基)-3-甲基-5-吡唑酮(4CMP)可溶性血管內皮生長因子受體1

匍匐曲霉原變種銻/Sb

靈芝屬 5--8-羥基喹啉還原
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)