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貨號 | FS-X10220 |
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產品介紹:
英文名稱:Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK 產品規格:20μl 濃度:5mM in DMSO 分子式:C30H44FN4O11 分子量:655.7 純度:≥95% (TLC) 儲存:-20℃,有效期6個月 |
中文名稱:Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制劑)
英文名稱:Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK
產品規格:20μl
貨號:FS-X10220
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
醋桿菌科乙酰肝2抗體Human SGPP1(Sphingosine-1-phosphate phosphatase 1) 大鼠花生四烯5脂氧合(Alox5)免疫試劑盒
彎孢菌人血清抗體Human Synaptotagmin-11 大鼠花生四烯12-脂氧合,白型(Alox12l/Alox12/Alox15)免疫試劑盒
粉紅單端孢血紅氧合 1/熱休克蛋白32抗體Human SYTL2 大鼠花生四烯(AA)免疫試劑盒
紋孢青霉磷化HER3受體抗體Human TACC1 大鼠紅生成受體(EPOR)免疫試劑盒
繩狀青霉磷化組蛋白去乙酰化4/5/7抗體Human C4B(Complement C4-B) 大鼠紅生成(EPO)免疫試劑盒
傳染性法氏囊病病異染色質蛋白1-γ抗體Human TACC3 大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )免疫試劑盒
發酵乳桿菌組蛋白H1抗體Human TACC2 大鼠黑色抗體(MC Ab)免疫試劑盒
紐纏叢梗孢組蛋白去乙酰化1抗體Human Syntaxin 3 大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌HAUS3蛋白抗體Human Syntaxin 2 大鼠核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒
假單胞菌屬熱休克蛋白93抗體Human SYN1 大鼠和肽(copeptin)免疫試劑盒
松生擬層孔菌磷化組蛋白去乙酰化3抗體Human SYN2 大鼠含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌組蛋白H2B抗體Human SYNGAP1 大鼠含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激1(Tie-1)免疫試劑盒
運動發酵單胞菌運動亞種短鏈L-3羥烷基脫氫抗體Human SYNJ1 大鼠過氧化脂質/乳過氧化物(LPO)免疫試劑盒
諾卡氏菌屬組蛋白去乙酰化9抗體Human Synaptogyrin-4 大鼠過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)免疫試劑盒
黃單胞菌組蛋白去乙酰化10抗體Human Synaptogyrin 1 大鼠過氧化物體增殖物激活受體β(PPAR-B/PPARD)免疫試劑盒
嗜熱脂肪地球芽胞桿菌HOXB4抗體Human Synaptojanin 2 大鼠過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)免疫試劑盒
細極鏈格孢Alternaria│tenuissima 質量規格:1000μg/ml,溶劑:川續斷皂乙
木霉Trichoderma│sp. 質量規格:1000μg/ml,基體:1.0mol/L HNO3京尼平
檸檬色赤桿菌Erythrobacter│citreus 質量規格:standard for GC特女貞
Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制劑)卷枝毛霉 2-氨基-4-基吡啶Ca2+ATP
釀酒酵母 2-乙基-N-TNFSF14
運動節桿 2-氨基-5-基吡啶過氧化物
發酵性酵母 N-甲基-3-苯基-3-羥基鈣調磷
鹽水球 3--4-甲氧基芐鹽鹽Slingshot同源物
唐菖蒲青霉 乙基乙炔鈣調蛋白依賴性蛋白激激
發根根瘤 4-溴甲酯鈣調蛋白依賴性蛋白激1D
毛栓孔 S-Boc-2-巰基-4,6-二甲基嘧啶鈣調依賴蛋白激II
盤長孢* 2-溴-4,6-二單絲蛋白激1
庫氏類芽孢桿 1-甲酰基-3-甲磺酰基-2-咪唑烷酮鈣調依賴蛋白激IV
鱗蓋紅菇 2,5-二甲基噻唑組蛋白去乙酰化
有柄靈芝 2-溴-5-甲基噻唑前列腺A1
普通鏈孢囊 2-甲基-4-基噻吩II型膠原
根瘤 苯并呋喃-2-甲γ-氨基丁運載蛋白1
厚垣孢普可尼亞 1-甲基-4-咪唑甲內皮轉化2
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