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貨號	FS-X11047

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：B-Raf抑制劑(HG6-64-1)

英文名稱：HG6-64-1

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X11047

產品介紹:

HG6-64-1是有效選擇性的B-Raf抑制劑,來自WO2011090738A2，化合物實例9(XI-1)。在B-raf V600E轉化的Ba/F3細胞中IC50值為0.09μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1315329-43-1

別名：HG-6-64-01;HG-6-64-1;HG 6-64-1

純度：99.05%

分子量：577.64

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜細小鏈孢菌Bacillus thuringiensis大鼠L解(PAL)

滅癌鏈霉菌Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)

沉積物冷彎曲菌Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)

綠梭鏈孢Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)

麥根腐平臍蠕孢Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)

宇佐美曲霉Bacillus thuringiensis大鼠干因子受體(SCFR)

淡天藍鏈霉菌Bacillus thuringiensis大鼠干因子受體(SCFR)

黃空柄牛肝菌Bacillus thuringiensis大鼠基質衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)

猴頭菇Bacillus thuringiensis大鼠基質衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)

微小鏈霉菌Bacillus thuringiensis大鼠血管生成受體Tie1(ANG-R-Tie1)

毛地黃殼針孢*Bacillus thuringiensis大鼠血管生成受體Tie1(ANG-R-Tie1)

香菇Bacillus thuringiensis大鼠含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)

土星擬威爾酵母subsufficiens變種Bacillus thuringiensis大鼠含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)

枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus thuringiensis大鼠基質金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

大腸埃希氏菌Bacillus thuringiensis大鼠基質金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

肉梭菌 C型Bacillus thuringiensis大鼠基質金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)

腫瘤血管內皮調節蛋白Robo4抗體黃褐假單胞菌列克星敦沙門氏菌

絡絲蛋白抗體呼吸系統貪銅菌密爾沃基沙門氏菌

視網膜母細胞瘤相關蛋白p130抗體產黃假單胞菌盧特格爾沙門氏菌

血栓調節蛋白抗體賽維瓦爾假單胞菌格里沙特沙門氏菌
B-Raf抑制劑(HG6-64-1)殺黃胞鏈霉新烏頭原堿

長枝木霉烏頭原堿

梭苯甲酰次烏頭原堿

間型脈孢苯甲酰新烏頭原堿

殺鮭氣單胞苯甲酰烏頭原堿

新疆假諾卡氏滇

豬鏈球分型血清參考品血清型 SS8 印

植物乳桿植物亞種次

塊新

大腸埃希氏 KFY

泡盛曲霉去甲斑蝥

Marivirga sp. 硬脂

草青霉梔子

異常漢遜酵母 5-腺三磷二鈉鹽

金黃色葡萄球金黃亞種 5-腺二磷二鈉鹽
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)