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貨號 | FS-X10902 |
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培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:PSD95抑制劑(Tat-NR2B9c)
英文名稱:Tat-NR2B9c
產品規格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg
貨號:FS-X10902
產品介紹:
Tat-NR2B9c是一個PSD95的抑制劑,EC50值是7nM,也能抑制p38. 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:500992-11-0 純度:98.22% 分子量:2518.88 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
炭角菌*大鼠睪Anti-TMEM237 Antibody人toll樣受體2(TLR2)
乳明串珠菌人乙型肝炎病前S2抗體Anti-TMEM30B Antibody人青少年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關蛋白2(HFE2)
偏腫栓孔菌大鼠游離睪Anti-TNF alpha Antibody人青少年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關蛋白2(HFE2)
細鏈格孢人乙型肝炎病前S2抗原Anti-TMPRSS15 Antibody人卷曲蛋白8(FZD8)
根霉人庚型肝炎病IgMAnti-TMPO Antibody人卷曲蛋白8(FZD8)
害艾美耳球蟲大鼠雄烯二Anti-TNFAIP2 Antibody人蝸牛同源物2(SNAI2)
粉紅聚端孢大鼠雌三Anti-TNF Alpha Antibody人蝸牛同源物2(SNAI2)
擬青霉人輸血傳播病/辛型肝炎病Anti-TNFAIP3 Antibody人高爾基蛋白73(GP-73)
白地霉大鼠17羥孕Anti-TNFAIP8 Antibody人高爾基蛋白73(GP-73)
斑玉蕈(真姬菇、蟹味菇)人戊型肝炎病IgMAnti-TNFAIP8L2 Antibody人TU3A蛋白(TU3A)
赫氏埃希氏菌大鼠狀腺原Anti-TNFAIP2 Antibody人TU3A蛋白(TU3A)
釀酒酵母人戊型肝炎病IgGAnti-TNFAIP6 Antibody人電子轉移黃蛋白β肽(ETFB)
矩圓黑盤孢人丁型肝炎IgMAnti-TNFAIP8L3 Antibody人電子轉移黃蛋白β肽(ETFB)
大鼠甲狀腺Anti-TNFRSFD Antibody人皮膚蛋白(DPT)
海泥黃桿菌大鼠游離甲狀腺Anti-TNFRSF1A Antibody人皮膚蛋白(DPT)
暗色節菱孢*人丁型肝炎IgGAnti-TNFAIP8L2 Antibody人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)
泛硫酯L1+3抗體蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種抗人絨毛膜促性腺激b7
人乳頭狀瘤E6相關蛋白抗體蘇云金芽孢桿菌熊本亞種抗人絨毛膜促性腺激7
同源蛋白UNCX抗體蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種抗型肝炎病毒膜區抗原單克抗體7株
核蛋白95抗體蘇云金芽孢桿菌托馬諾夫亞種抗肺炎支原體單克抗7株
PSD95抑制劑(Tat-NR2B9c)尖頂羊肚 4-苯甲酰角質
大腸埃希氏 銅、鐵、鎳、釩/Cu, Fe, Ni, V骨堿性磷
微小鏈霉 銅、鐵、鎳、釩/Cu, Fe, Ni, VCD14分子
滋養節桿 4-溴苯輪狀病IgG抗體
生暗灰鏈霉 銅、鐵、鎳、鋅/Cr, Cu, Ni, Zn核糖基轉移1
直喙鐮刀 羧甲基-β-環糊精核糖磷焦磷激1
密蘇里游動放線 鎘、銅、鉛、鋅/Cd, Cu, Pb, Zn脫氫
耐鹽芽孢桿 鈣、鍶、鋇、鋰/Ca, Sr, Ba, Li絲蛋白
解淀粉芽孢桿 2,6-二吡啶-4-甲內皮
蘇云金芽胞桿庫爾斯塔克亞種 枯名Tau蛋白
金龜子綠僵 鎘、銅、鎳、鋅/Cd, Cu, Pb, Zn磷化Tau蛋白
產凍膠 塞來西布Aβ42
白色雞腿菇 鈣,,鎂,鈉/Ca, K, Mg, Na(鹽介質)偽狂犬分泌型sIgA抗體
腸膜明串珠右旋葡聚糖亞種 3,4-二羥基半胱蛋白3
藤黃八疊球 S-8大孔吸附樹脂乳清蛋白
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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