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貨號(hào)	FS-X10789

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：ALK5抑制劑(GW788388)

英文名稱：GW788388

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10789

產(chǎn)品介紹:

GW788388是一種有效的ALK5抑制劑，IC50值18nM；同時(shí)抑制TGF-β II型受體和激活素II型受體的活性，但對(duì)BMP II型受體無(wú)作用。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：452342-67-5

純度：99.64%

分子量：425.48

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

粉紅單端孢霉艾柯病 IgM(間接法二步法)Anti-MAVS Antibody人兒茶(CA)

大腸埃希氏菌輪狀病 IgG(間接法二步法)Anti-MAZ Antibody人兒茶(CA)

膜醭畢赤酵母輪狀病 IgM(間接法二步法)Anti-MBTPS1 Antibody人半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)

嗜鹽沉積物桿菌腺病 IgG Ⅲ型(間接法二步法)Anti-MBD1 Antibody人半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)

雷氏普羅威登斯菌腺病 IgM Ⅲ型(間接法二步法)Anti-MBD3 Antibody人乙酰受體抗體(AChRab)

鑲邊鏈霉菌腺病 IgG Ⅶ型(間接法二步法)Anti-MBL2 Antibody人乙酰受體抗體(AChRab)

灰橙鏈霉菌腺病 IgM Ⅶ型(間接法二步法)Anti-MBTPS2 Antibody人5羥色(5-HT)

樟疫霉腺病 IgM Ⅺ型(間接法二步法)Anti-MBTPS2 Antibody人5羥色(5-HT)

球色單隔孢屬大鼠褪黑Anti-MC5R Antibody人抑制A(INH-A)

銅綠假單胞菌兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白Anti-MC1R Antibody人抑制A(INH-A)

黑曲霉小鼠癌胚抗原Anti-MCHR2 Antibody人性激結(jié)合球蛋白(SHBG)

灰黃鏈霉菌蘇州亞種人ω干擾Anti-MCM3AP Antibody人性激結(jié)合球蛋白(SHBG)

楚氏喜鹽芽孢桿菌腺病 IgG Ⅺ型(間接法二步法)Anti-MCPH1 Antibody人脫氫表雄S7(DHEA-S7)

聚貪噬菌魚類白介1αAnti-MCPH1 Antibody人脫氫表雄S7(DHEA-S7)

裂孔平伏菌腺病 IgG 混合型(間接法二步法)Anti-MDM1 Antibody人脫氫表雄(DHEA)

粘膜鞘單胞菌腺病 IgM 混合型(間接法二步法)Anti-MDFI Antibody人脫氫表雄(DHEA)

肌相關(guān)蛋白1抗體球孢鏈霉菌人源胰腺癌細(xì)胞

RAS癌基因家族蛋白R(shí)AB40A抗體青色鏈霉菌人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞亞系

RAS癌基因家族蛋白R(shí)AB40C抗體紅霉鏈霉菌人肺腺癌放后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移細(xì)胞

類風(fēng)濕因子抗體滅蚊鏈霉菌瘤牛皮膚細(xì)胞
ALK5抑制劑(GW788388)地衣芽孢桿三(2-噻吩基)膦胱抑

球孢白僵煌綠乳糖膽鹽肉湯BGLB（含小倒管）骨蛋白

檸檬色節(jié)桿煌綠乳糖膽鹽肉湯BGLB（含小倒管）輪狀病抗體

滑假絲酵母 EC肉湯（含小倒管）仙臺(tái)病抗體

釀酒酵母 N-(2-氨乙基)甘印度猬因子

納什維爾鏈霉 LST-MUG信號(hào)3A

雜色曲霉 LST發(fā)酵管（含小倒管）圓環(huán)病2型

耐寒短桿三糖鐵管蛋白聚糖

羊肚改良EC（mEC+n）肉湯白介5

綠色木霉 2-叔丁基對(duì)甲I型膠原蛋白

牛絲膜改良EC（mEC+n）肉湯總膠原

辣椒溶桿磷鹽緩沖液（PBSpH7.2）白介21

鏈格孢營(yíng)養(yǎng)瓊脂(水質(zhì)監(jiān)測(cè))白介20

溜曲霉異硫基乙乙酯白介22

*灰葡萄孢 D-環(huán)絲溶液AKT蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)