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貨號	FS-X11049

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：HSP90抑制劑(BIIB021)

英文名稱：BIIB021

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X11049

產品介紹:

BIIB021是一種可全合成的HSP90抑制劑，Ki值和EC50值分別為1.7nM和38nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：848695-25-0

別名：CNF2024

純度：99.62%

分子量：318.76

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

腫瘤血管內皮標志物8抗體 TEM8

熱休克蛋白75抗體 TRAP1

四分子交聯體15抗體（四旋蛋白） TSPAN15

腱調蛋白抗體（軟骨調節su樣1蛋白） TNMD

血栓suA2受體抗體 TXA2R

Toll樣受體11抗體 TLR11

血小板反應蛋白抗體 THBS1

端粒mei相關蛋白2/端粒mei逆轉錄mei抗體 TERT

四分子交聯體17抗體（四旋蛋白） TSPAN17

髓系細胞觸發受體1抗體 TREM1

血小板反應蛋白2/凝血mei敏感蛋白2抗體 Thrombospondin 2

緊密連接蛋白2抗體 TJP2
HSP90抑制劑(BIIB021)釀酒酵母 Vitexdoin A

玫瑰色紅球 Alstonic acid A

白靈側耳 Neoprzewaquinone A

節桿屬 Sventenic acid

哈茨木霉 Mirabijalone D

果生鏈核盤 Chlorantholide B

蘇云金芽孢桿山東亞種 Chlorantholide A

枯草芽孢桿(斜面個工作日凍干管25-30個工作日) 7,2'-Dihydroxy-5,8-dimethoxyflav

梨生囊殼孢 11-Hydroxyrankinidine

施氏假單胞 11-Hydroxygelsenicine

釀酒酵母 Bi-linderone

黃棕鏈霉 Yunnandaphninine G

蠟狀芽孢桿瓦來薩明堿 N-氧化物

馬腺疫鏈球獸疫亞種 Sulfocostunolide B

類干酪乳桿銀線草 D
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)